xiap在卵巢癌细胞中调控nf-κb和ciap2中的作用

《xiap在卵巢癌细胞中调控nf-κb和ciap2中的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、遵义医学院硕士学位论文XIAP在卵巢癌细胞中调控NF--κB和cIAP2中的作用姓名：王娜申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：郑洪201205遵义医学院硕士学位论文XIAP在卵巢癌中调控NF-KB和CIAP一2中的作用XIAP在卵巢癌细胞中调控NF-KB和ClAP2中的作用中文摘要目的：细胞凋亡与肿瘤的发生发展密切相关，凋亡抑制蛋白是导致化疗耐药的主要原因，在卵巢癌中主要的凋亡抑制蛋白家族(Inhibitorofapoptosisprotein，IAPs)是XIAP、cIAP2和Survivin。核因子(NF—KB)是重要的调节细胞增殖和凋亡的转录因子，可调节凋亡抑制蛋白

2、家族(IAPs)成员cIAP2、XIAP等表达。但是在卵巢癌中XIAP、NF-KB、以及cIAP2三者之间的关系尚未见报道，本实验运用RNA干扰技术沉默卵巢癌细胞株SKOV-3的XIAP基因后，观察细胞凋亡以及cIAP2、NF-KB的变化，探讨XIAP表达水平与cIAP2和NF—KB表达水平之间的关系，为卵巢癌的基因治疗的策略选择奠定基础。方法：研究对象为人卵巢癌细胞系(SKOV一3)。(1)针对XIAP的siRNA设计和选择。(2)用RPMI一1640培养基培养卵巢癌(SKov一3)细胞。(3)通过脂质体将XIAPFAM—siRNA转染进入卵巢癌(SKOV-3)细胞，流式细胞仪分别检测

3、不同浓度50nmol、100nmol、200nmol的转染率。(4)用转染率最高的转染浓度转染细胞，实验分组：空白对照组、脂质体组、非特异干扰组、转染XIAP—siRNA组(XIAP—siRNA)，48小时后收集各组细胞用MTT法检测各组细胞的增值率。(5)AnnexinV—FITC／PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率。(6)实时荧光定量PCR检测各组细胞XIAPmRNA、cIAP2mRNA、NF—KBP65mRNA的相对表达量。(7)WesternBlot检测各组细胞XIAP、cIAP2、NF-KBP65蛋白表达情况。结果：(1)XIAPFAM—siRNA转染细胞后流式细胞仪检测三个

4、浓度50nmol、100nmol、200nmol的转染率分别为50％、51．42％、75．66％。(2)用转染率最高的浓度XIAP-siRNA200nmol转染卵巢癌细胞，48小时后收集各个组的细胞，MTT法检测各组卵巢癌细胞增值率的变化，空白对照组、脂质体组、非特异干扰组之间细胞增值率分别是1004-0、93．00±0．Ol、93．31±0．02、45．34±0．01，转染XIAP—siRNA组的细胞增值率明显低于空白对照组细胞增值率和脂质体组细胞增值率以及非特异干扰组细胞增值率，其差异有统计学意义，(P

5、，(P>0．05)。(3)AnnexinV—FITC／P工双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率，结果显示：空白对照组、脂质体组、非特异干扰组、转染4遵义医学院硕士学位论文XIAP在卵巢癌中调控NF．KB和CIAP．2中的作用XIAP-siRNA组的凋亡率分别是3．42％、5．12％、6．28％、27．58％。转染XIAP-siRNA组凋亡率明显高于空白对照组、脂质体组、非特异干扰组的凋亡率，其差异有统计学意义，(P<0．05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组之间凋亡率，其差异无统计学意义，(P>O．05)。(4)实时荧光定量PCR检测各组细胞XIAPmRNA、clAP2mRNA、NF—K

6、BP65mRNA的相对表达量，结果显示：空白对照组、脂质体组、非特异干扰组、转染XIAP—siRNA组的XIAPmRNA相对表达含量分别为167．38±56．58、163．63±61．06、160．88±38．39、48．78±20．08，转染XIAP-siRNA组XIAPmRNA表达含量明显低于空白对照组、脂质体组、非特异干扰组XIAPmRNA表达含量，其差异有统计学意义，(PO．05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组、转染XIAP—siRNA组的NF—KBP65mRNA相对表达

7、含量分别为507．06±111．73、512．75±96．54、488．02±118．42、281．02±71．43，转染XIAP—siRNA组NF-KBP65mRNA表达含量明显低于空白对照组、脂质体组、非特异干扰组NF-KBP65mRNA表达含量，其差异有统计学意义，(P<0．05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组之间NF-KBP65mRNA表达含量，其差异无统计学意义，(P>O．05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组、