卵巢癌细胞nihovcar-3中xiap、ciap2表达水平受pi3kakt调控的实验研究

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1、遵义医学院硕士学位论文卵巢癌细胞NIH：OVCAR--3中XIAP、cIAP2表达水平受PI3K/AKT调控的实验研究姓名：谭娜申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：郑洪201205遵义医学院硕士学位论文卵巢癌细胞NIH：OVCAR一3中XIAP、cIAP2表达水平受P13K／AKT调控的实验研究卵巢癌细胞NIH：OVCAR-3中XIAP、cIAP2表达水平受Pl3K／AKT调控的实验研究中文摘要目的：细胞凋亡的紊乱与肿瘤的发生发展有着密切的关系，P13K／AKT信号通路在广泛的人类肿瘤

2、谱中失调，其可通过调节下游效应分子影响细胞凋亡来促进肿瘤细胞的增殖，凋亡抑制蛋白家族也是通过抑制细胞凋亡来促进肿瘤细胞的增殖。而在卵巢癌中，P13K／AKT、XIAP、cIAP2的高表达与肿瘤发生、耐药有着一定的关系，但是关于三者在卵巢癌中的调控机制的研究目前尚未见报道。本实验运用P13K特异性抑制剂LY294002作用卵巢癌细胞株NIH：OVCAR一3后，观察细胞增殖状况、凋亡的改变及对XIAP和cIAP2的影响，以探讨XIAP、cIAP2表达水平与P13K／AKT的关系，为肿瘤的靶向治疗奠定理论基

3、础。方法：研究对象为人卵巢癌细胞NIH：OVCAR一3。首先在37。C，5％C0：，20％0。和95％湿度条件下二氧化碳培养箱中培养卵巢癌细胞，提取生长指数期细胞，分别用于以下各步试验。(1)以不同浓度(O、5、10、20、40ummol／L)的LY294002作用于细胞，并于24h、48h、72h、96h收集细胞，MTT法、流式细胞术AnnexinV-FITC检测不同浓度、不同时间LY294002作用于卵巢癌细胞NIH：OVCAR-3后各组细胞的增殖状况及凋亡改变。(2)RT-PCR、Western

4、Blot检测LY29400240umol／L作用细胞48小时P13KmRNA、AKTmRNA及P13K、AKT蛋白质的情况，观察LY294002抑制P13K的效果。同时检测P13K／AKT受抑制后XIAPmRNA、cIAP2mRNA及XIAP、cIAP2蛋白质改变情况。(3)实验数据用SPSSl7统计软件处理。结果：(1)不同浓度(5、10、20、40ummol／L)LY294002对卵巢癌细胞NIH：OVCAR一3存活率的影响：24h时细胞存活率分别为92．27％、91．32％、84．86％、71．

5、84％；48h时细胞存活率分别为91．4％、87．56％、82．8％、66．83％；72h时细胞存活率分别为88．79％、84．87％、79．21％、66．74％；96h时细胞存活率分别为88．62％、81．83％、74．66％、55．4％。5ummol／LLY294002随着作用时f司的延长，细胞增殖活性并无明显改变，统计学比较无差异(p>O．05)；而10、20、40ummol／LLY294002随着作用时间的延长，细胞存活率下降，各组比较有统计学差异(p

6、94002作用24h对细胞增殖活性无影响(p>0．05)；而在48h、72h、96h时随着LY294002浓度的增4遵义医学院硕士学位论文卵巢癌细胞NIH：OVCAR一3中XIAP、cIAP2表达水平受P13K／AKT调控的实验研究加，细胞存活率减少，各组比较有统计学差异(p

7、％、6．51％、7．28％、9．62％、10．49％；72h时凋亡率分别为2．98％、6．78％、7．73％、9．22％、12．14％；96h时凋亡率分别为3．64％、7．23％、8．21％、11．57％、15．43％。相同浓度时，随着作用时间的延长，细胞凋亡率增加，其差异有统计学意义(pO．05)，而在48h、72h、96h时随着LY294002浓度的增加，细胞凋亡率增加，其差异有统计学意义

8、(p