丹酚酸b、丹参酮ⅱa联合体外诱导bmscs分化为心肌样细胞的研究

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2、经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。导师签名：≤逗吹研究生签名∥参勿年月日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1英文摘要．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7研究论文丹酚酸B、丹参酮IIA联合体外诱导BMSCs分化为心肌样细胞的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8刖吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．芍材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1l结果⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l7附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25讨论⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．28结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33参考文献⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34综述中医药在诱导骨髓问充质干细胞分化为心肌样细胞的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．45申文摘要丹酚酸B、丹参酮

4、

5、A联合

6、体外诱导BMSCs分化为心肌样细胞的研究摘要冠心病、心肌梗死等缺血性心脏病是一种病势凶险、死亡率较高的全球性疾病。由于心肌细胞是终末分化细胞不能再生，因此，当发生心肌梗死后，心肌细胞坏死、凋亡造成细胞数目减少，心肌细胞只能由成纤维细胞填充，坏死的心肌则由瘢痕组织取代，并逐步发生心室重构导致心脏收缩功能下降以至发生顽固性心力衰竭。目前心肌梗死后的治疗手段主要包括药物治疗、介入治疗和手术治疗。中医药治疗缺血性心脏病，临床辫证多属于胸痹、心痛范畴。因证论治可在一定程度上缓解或解除患者的临床症状，但单纯中药治疗仍不能在短时间内补充缺乏的心肌细胞，也就无法从

7、根本上治愈患者。因此人们仍在不断寻找新的治疗方法，期望能使坏死的心肌细胞得以修复或再生，干细胞移植便成为了国内外研究的热点。骨髓间充质干细胞(BMSCs)是一类具有自我更新和多分化潜能的细胞，这些特性决定其可以在体外增殖生长，在特定的细胞因子和诱导剂的作用下分化成各种功能细胞。BMSCs在一定的诱导条件下可定向分化为心肌细胞，目前大多数研究者采用的是5．氮胞苷对其进行诱导，而临床上常用的治疗心血管疾病的中药作为诱导剂也逐渐成为人们关注的对象。丹参在临床上广泛用于治疗心血管系统疾病，其主要化学成分包括以丹酚酸B(salvianolicacidB，Sa

8、lB)为代表的水溶性酚酸类化合物和以丹参酮IIA为代表的醇溶性菲醌类化合物。丹参的水溶性成分以抗氧化作用等突出；脂溶性成分以抗菌、抗炎等作用更显著。这种作用的多样性正是丹参具有广泛适应症的基础。本实验采用中药丹参的有效成份SalB及丹参酮IIA作为诱导剂体外诱导BMSCs向心肌细胞分化，观察分化过程中细胞形态的变化和特异基因的表达，同时从形态学、蛋白表达等多层面比较联合应用诱导剂是否较单独应用一种诱导剂更有利于细胞的分化，从而探索体外BMSCs诱导分化为心肌细胞的新方法。用2周龄健康SD大鼠28只，雌中丈摘要雄不限，体重15～309，颈推脱臼法处死

9、，75％酒精中浸泡10rain。将大鼠移至无菌操作问内，用经高压蒸汽灭菌的器械快速取胫骨和股骨，去除周围组织，切除胫骨和股骨两端，放入含有D—Hanks液／双抗(青霉素100mg／L，链霉素1009／L)的缓冲液中冲洗2次。另取～套无菌器械去除长骨骨骺端显露骨髓腔，用培养液将骨髓腔中的骨髓冲出后收集离心，1500r／min离一t二,5min，弃上清液。加入含lo％H台牛血清的IMDM培养基反复吹打，取一滴细胞悬液加入lOplO．04％锥虫蓝混匀，血细胞计数板计数活细胞，以1×1014／L密度接种于培养瓶中，置于37℃，5％CO：的培养箱中培养。12

10、h后半量换液，轻柔操作，仔细观察细胞贴壁情况，至24h完全更换培养基。24h后换液，此后每3d换液1次，贴壁细胞达90％融