cxcr4基因转染的猪bmscs体外诱导分化为心肌样细胞的实验研究

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1、CXCR4基因转染的猪BMSCs体外诱导分化为心肌样细胞的实验研究作者：陈中璞，李拥军，姚玉宇，蒋益波，钱琪，潘啸东【摘要】目的:探讨基质细胞衍生因子1(SDF1)受体CXCR4基因转染的猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外诱导分化为心肌样细胞的可行性。方法：按照Nance方法培养BMSCs，转染带荧光的CXCR4基因，流式细胞仪检测转染后BMSCs的细胞周期，用5氮胞苷(5aza)诱导，并行结蛋白、肌球蛋白重链、心肌特异性肌钙蛋白I免疫组化鉴定。对照组为未转染CXCR4基因的BMSCs。结果：体

2、外培养的原代BMSCs10～14d达到融合，CXCR4基因转染后的BMSCs能成功表达CXCR4，转染前后细胞周期无明显改变。与对照组相同，经5aza刺激后，部分BMSCs成梭形，结蛋白、肌球蛋白重链、心肌特异性肌钙蛋白I免疫组化染色均为阳性。结论:CXCR4基因转染的猪BMSCs在体外条件下生长稳定,传代后仍保持未分化状态,有分化成心肌样细胞的潜能。【关键词】基质细胞衍生因子1;CXCR4基因;骨髓间充质干细胞;体外诱导;心肌样细胞　　[Abstract]Objective:Toinvestigat

3、ethepossibilityofinducingporcinebonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)13whichweretransfectedbyCXCR4genefirst,theacceptorofSDF1,todifferentiateintocardiomyocyteslikecellsinvitro.Methods:BMSCswereisolatedfrombonemarrowandpurifiedbycentrifuge.Theproliferati

4、onandgrowthcharacteristicswereobservedinprimaryandpassageculture.BMSCsweretransfectedbyCXCR4gene,thenanalyzedcellcyclebyflowcytometer.Afterbeingcoculturedwith5azacytidinefor24h,theculturedcellswereevaluatedbyimmunohistochemicalstains.ThecontrolgroupwasB

5、MSCswithoutCXCR4gene.Results:Thecellswerefusedinsinglelayerafterplatingfor10～14days.BMSCswhichweretransfectedcouldexpressCXCR4successfully,andthecellcycledidntchanged.Thesameasthecontrolgroup,afterbeingcoculturedwith5azacytidine,someoftransfectedBMSCsb

6、ecamespindlelikeandformedanetworkofmyotubule.MyotubularcellswerefoundtobestainedwithpositivelyMHC,desminandTnI.Conclusion:PorcineBMSCswhichweretransfectedbyCXCR4genefirstcanbeisolatedfrompostnatalbonemarrowthroughtheiradherentability,andcanbeinducedtodif

7、ferentiateintocardiomyocyteslikecellsinvitro.　　[Keywords]stromalcellderivedfactor1;CXCR4gene;bonemarrowmesenchymalstemcells;induceinvitro;13cardiomyocyteslikecells　　心肌坏死是心血管系统的常见病，其显著特征是功能性心肌细胞大量死亡。一般认为，成熟的心肌细胞是终末分化细胞，缺乏再生能力[1-2]。有研究[3]表明，少数成体心肌细胞在终末分化

8、之后还具有分裂能力，但由于数量极少，不能达到修复损伤心肌的目的。因此，增加心肌细胞或心肌样细胞的数量可以改善此类病人的心功能，细胞移植成为治疗心肌坏死的新策略。然而单纯细胞移植的效率却不高[4-5],为提高移植效率，人们的目光转移到在干细胞的动员、归巢和分化过程中发挥重要作用的细胞因子上。其中，基质细胞衍生因子1(SDF1)与其特异性受体CXCR4相互作用，参与到干细胞动员、归巢、黏附、存活增殖的各个步骤，在心脏的细胞治疗