莪术组植物的dna条形码鉴定及药材的质量评价研究

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1、广东药学院硕士研究生毕业论文广东药学院硕士研究生学位论文题目：莪术组植物的DNA条形码鉴定及药材的质量评价研究姓名：郝虹学号：2111148090院系：中药学院专业：中药学导师姓名李书渊（教授）及职称：顾利红（主任中药师）2014年5月万方数据广东药学院硕士研究生毕业论文万方数据广东药学院硕士研究生毕业论文分类号：___________密级:__________UDC:___________莪术组植物的DNA条形码鉴定及药材的质量评价研究StudyonDNABarcodingIdentificationofCurcumaplantsandQualityEv

2、aluationofCurcumaeRhizoma姓名：郝虹学号：2111148090院系：中药学院专业：中药学研究方向：中药质量控制与质量标准研究导师姓名：李书渊（教授）论文提交日期：2014年4月论文答辩日期：2014年5月学位授予单位：广东药学院2014年5月万方数据广东药学院硕士研究生毕业论文万方数据广东药学院硕士研究生毕业论文广东药学院学位论文原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，系我个人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。除文中已特别加以标注和致谢的地方外，不包含其它个人或机构已经发表或撰写过的研究成果。对本研究做出贡献的其它个人和

3、集体，均已在文中明确说明和致谢。本人充分意识到本声明的法律结果完全由本人承担。学位论文作者签名：＿＿＿＿＿日期：年月日学位论文使用授权的声明本人完全了解广东药学院有关保留和使用学位论文的规定，学校有权保留和向有关部门或机构送交本论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库，可以采用影印、缩印或其它复印手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后适用本声明。论文作者签名：＿＿＿＿＿论文导师签名：＿＿＿＿＿日期：年月日万方数据广东药学院硕士研究生毕业论文万方数据广东药学院硕士研究生毕业论文莪术组植物的DNA条形码

4、鉴定及药材的质量评价研究摘要莪术（CURCUMAERHIZOMA）为姜科植物蓬莪术CurcumaphaeocaulisVal、广西莪术CurcumakwangsiensisS.G.LeeetC.F.Liang或温郁金CurcumawenyujinY.H.ChenetC.Ling的干燥根茎。后者习称“温莪术”。莪术为常用中药，国内需求量较大，同时大量出口东南亚、日本、美国等地。本文综合应用了传统鉴定方法和DNA条形码技术相结合的手段对三种不同来源的莪术进行研究，并对其质量进行综合评价，从而为莪术的开发利用提供依据。目的：莪术作为多来源的药材，临床使用十分混乱

5、。其不同来源药材的外观性状相近，就连一些专家学者都难以分辨，国内学者对其分种问题也一直存在着争议。鉴于莪术市场存在的来源不明等情况比较严重，有必要建立基于DNA条形码的莪术鉴别体系，对传统鉴定加以补充。对不同来源的莪术进行质量监控，明确不同来源莪术的化学成分差异，以更好地指导莪术的临床应用。方法：1.传统的基原鉴定及性状鉴定：参照《中国植物志》、《中国药典》，结合药材的性状鉴定，根据专家鉴定结果，初步判断来源。2.DNA条形码鉴定：采用CTAB法、试剂盒法提取基因组总DNA，以ITS2，psbA-trnH做为通用引物，运用2*PCRMIX试剂盒进行PCR扩

6、增，产物经测序后得到序列，通过CodonCodeAligner4.2.5、Mega6.05等软件对测序后的序列进行系统分析，考察不同种之间的亲缘关系，建立莪术组植物的分子鉴定方法。3.常规检查：根据《中国药典》（2010年版一部）莪术项下对所收集样品进行常规项检查，为后续的实验结果提供基础数据及依据。4.气相色谱分析：运用GC测定法，参考文献，并加以改进，建立了莪术GC指纹图谱的研究方法。绘制其指纹图谱，进行比对、研究；并运用聚类分析统计方法对结果加以讨论。结果：1.传统的基原鉴定及性状鉴定：经专家鉴定莪术样品分别为蓬莪术、广西莪术、I万方数据广东药学院硕

7、士研究生毕业论文温郁金的原植物及干燥根茎，确定了其基原。2.DNA条形码鉴定：CTAB法和试剂盒法均能从莪术中提取到足够量的基因组DNA用于PCR的扩增，ITS2、psbA-trnH引物扩增产物经过测序，结果表明ITS2基因间隔区序列存在大量简单重复序列，造成结合、杂合问题，因此我们选用psbA-trnH序列进行莪术鉴定，并建立了莪术系统进化发育树。3.常规检查：对莪术进行检查，结果表明灰分测定及浸出物测定项均符合规定，而水分测定项及挥发油测定项有部分样品不符合规定。4.气相色谱分析：用建立的色谱条件，测定得到的莪术GC图谱，共有15个共有峰，其中指认了4

8、个色谱峰。共有峰的相对峰面积RSD均小于3%，12批的莪术指纹图谱