石斛、北豆根、肉桂的dna条形码鉴定及铁皮石斛叶绿体基因组研究

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1、．中＠聲５刘《辦＞硕±研究生学位论文龜北京协和医学院研究生院学校代码ｉ１００２３学号：Ｓ２０１２００９（Ｂ２硕ｄｒ学位论文石解、北豆根、肉桂的ＤＮＡ条形码鉴定及铁皮石解叶绿体基因组研究ＤＮＡＢａｒｃｏｄｉｎＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＤｅｎｄｒｏｂｉｉＣａｕｌｉｓｇ，ＭｅｎｉｓｅｒｍｉＲｈｉｚｏｍａＣｉｎｎａｍｏｍｉＣｏｒｔｅｘａｎｄｔｈｅＳｔｕｄｏｎｐ，ｙＣｈｌｏｒｏｐｌａｓｔＧｅｎｏｍｅｏｆＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ所院；药用植物研究所

2、姓名：杨培指导教师；匆腑副硏究员学科专业；中药学研究方向：中药鉴定完成日期：２０１５年５月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加Ｗ标注和致谢的地方外，不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字曰期：２〇＊歹年ｉ月／主曰叔巧学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解化京协和医学院有关

3、保存、使用学位论文的管理办法。有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复巧件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权北京协和医学院可将学位论文的全部或部分内容编入有关、。数据库进行检索，可Ｗ采用影印缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：＞（签字日期１Ｔ日签字日期：方｜／日：说Ｓ年６月Ｊ＾年《月Ｉ学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：：邮编目录中；＾摘要ＩＡｂｓｔｒａｃｔＩｌｌ第一章文献综述１１１．１中药

4、鉴定方法的起源１．２基于理化性质分析的蓬勃发展期２１．３基于核酸信息的分子鉴定期４１．４展望７第二章石解及其混伪品ＤＮＡ条形码鉴定及铁皮石解叶绿体基因组研究９２．１石解及其海伪品ＩＴＳ２序列鉴定研究９２丄１材料与方法１０２丄２结果及分析１４２丄３讨论１７２．２铁皮石解叶绿体基因组测序、分析及ＤＮＡ条形码筛选１９２．２．１材料与方法２０２．２．２结果与讨论２２２．２．３小结３５－２％．３基于ｐｓｂＫｐｓｂＪ候选序列的石解属部分物种及其混伪品鉴定研究２．３．１材料与方法％

5、２３．２结果３７２．３．３讨论３８２．４结论３９第Ｈ章北豆根及其混伪品ＤＮＡ条形码鉴定研究４１３．１材料与方法４２３．１．１材料４２３．１．２方法４４３．２结果与分析４６３．２．１ＰＣＲ扩増、测序效率及序列特征４６３．２．２种内种间遗传距离分析及物种鉴定４７３．３讨论４８－３．３．１ｓ＆４化《好序列ｐｏｌ结构对测序效率的影响４８ｐｙ３．３．２ＩＴＳ２多拷贝现象与鉴定效率４８３．３．３ＤＮＡ条形码鉴定对北豆根及其混伪品鉴定的稳定性及准确性４９３．３

6、．４ＤＮＡ条形码技术在药材流通市场监管中的应用４９３．４结论５０第四章肉桂及其混伪品ＤＮＡ条形码鉴定研究５１４．１材料与方法５２４丄１材料５２４丄２方法５２４．２结果与分析５４４．２．１ＰＣＲ扩增与测序效率５４４５４．２．２肉桂及其混伪品种内种间变异分析４巧．２．３肉桂及其混伪品的ＮＪ树鉴定４．３讨论５６４．３．１皮类药材ＤＮＡ提取５６－仍你４５．３．２ｐｓＭ序列可实现肉桂药材及其混伪品的准确鉴定７４３．３ＤＮＡ条形码分子鉴定在监管药食同源物种中的应用前景５７

7、４．４觀５８参考：＾：献５９致谢６９７１个人简搪要ＤＮＡ条形码自提出Ｗ来，经过十余年的发展，技术体系日渐成熟，在中药鉴定方面的应用也越来越广泛。本研究对石解、北豆根、肉桂及其混伪品进行ＤＮＡ条形码鉴定研究，并结合铁皮石解叶绿体基因组进行了珍稀漸危石解属ＤＮＡ条形码序列筛选研究。主要研究结果如下：（１）考察打Ｓ２序列对石斜属４０种、１７３份样品的鉴定能力，结果表明本研究设计的ＤＯＦ／Ｒ引物可Ｗ实现铁皮石解药材ＩＴＳ２序列的扩增和测序，石触属ＩＴＳ２序列种内变异小于种间变异，鉴定效率为７５．７

8、２％和別．２７％（ＢＬＡＳＴ和ＮｅａｒｅｓｔＤｉｓｔａｎｃｅ方法），能实现对石解属大部分物种的准确鉴定