中药材薄荷的DNA条形码鉴定研究

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1、中药材薄荷的DNA条形码鉴定研究庞晓慧，徐海滨，韩建萍，宋经元（中国更学科学院北京协和更学院药用植物研究所，中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室，北京100193）摘要：目的：利用DNA条形码鉴定技术快速、准确地鉴别中药材薄荷及其密切相关种。方法：提取薄荷药材及其易混品的DNA、对ITS2序列进行PCR扩增和测序，应用CodonCodeAlignerV3.0对测序峰图进行校对拼接，去除低质量序列及引物区，获得ITS2序列。利用MEGA5.0软件计算物种种内种间Kimura2-parameter（K2P）遗传距离。采用相似性搜索法、最近距离法、构建NJ系统

2、聚类树等方法进行鉴定分析。结果：薄荷药材与其他密切相关种之间的K2P遗传距离分布于0.071〜0.231之间，大于薄荷种内K2P遗传距离（0〜0.006）；三种鉴定方法也表明ITS2序列适合鉴別薄荷药材与其密切相关种。结论：ITS2条形码可有效鉴别中药材薄荷及其易混品，为快速、准确地鉴定薄荷提供了科学依据。关键词：DNA条形码；ITS2；薄荷中图分类号:R282.5ApplyingDNAbarcodingtechniquetoidentifyMenthaeHaplocalycisHerbaPANGXiaohui,XUHaibin,HANJianping,SO

3、NGJingyuan(TheKeyLaboratoryofBioactiveSubstancesandResourcesUtilizationofChineseHerbalMedicine,MinistryofEducation,InstituteofMedicinalPlantDevelopment,ChineseAcademyofMedicalSciences&PekingUnionMedicalCollege,Beijing100193)Abstract:Objective:ToidentifyMenthaeHaplocalycisHerbaandit

4、scloselyrelatedspeciesusingDNAbarcodingtechnique・Method:TotalgenomicDNAwasisolatedfromMenthaCanadensisanditscloselyrelatedspecies・NuclearDNAITS2sequenceswereamplified,andpurifiedPCRproductsweresequenced・SequenceassemblyandconsensussequencegenerationwereperformedusingtheCodonCodeAli

5、gnerV3・()・TheKimura2-Parameter(K2P)distanceswerecalculatedusingsoftwiireMEGA5.0.IdentificationanalyseswereperformedusingBLAST1,NearestDistanceandneighbor-joining(NJ)methods・Result:Theintra-specificgeneticdistancesofMenthaCanadensiswererangedfrom0to0.006,whichwerelowerthaninter-spec

6、ificgeneticdistancesbetweenMenthaCanadensisanditscloselyrelatedspecies(0.071-0.231).AllthethreemethodsshowedthatITS2coulddiscriminateMenthaCanadensisfromitscloselyrelatedspeciescorrectly.Conclusion:TheITS2regionisanefficientbarcodeforidentificationofMenthaeHaplocalycisHerba,whichpr

7、ovidesascientificbasisforfastandaccurateidentificationoftheherb・Keywords:DNAbarcoding;ITS2;MenthaeHaplocalycisHerba0引言中药材的准确鉴定是研究中药品种、质量和中药安全应用的前提和保障，也是中医药产业正常运行和发展的重要基础，一直备受关注。由于我国中药材种类繁多，药材混伪品也较多，使中药材鉴定面临挑战。随着中药材鉴定方法的发展和历代科学家的努力，国内已经形成中药四大传统鉴定方法，即基原鉴定、性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定，这些方法在过去基金项目：高

8、等学校博士学科点专项科研基金资助课题(2011110