鸡源耐铅乳酸菌的筛选鉴定及体内外吸附性能研究

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1、万方数据IsolationandIdentificationofLead．．resistantLacticAcidBacteriafromChickenandStudyonabsorptionofalead．．resistantstraininvivoand-‘vitro田。ubmittedtolaeslssul9to上QingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyManZhaohong(C

2、ollegeofFoodScienceandEngineering)Supervisor：Prof．ZhaoHongkunQingdao．ChinaJune，2014一．煺㈣万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：I融纽肋

3、渺6L时间：如f十年6月冲日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：炻舭娩时间：wc斗年6月狮曰导师签名：时问：锄C斗年f月珥日万方数据青岛农业大学硕士专业学位论文摘要鸡源耐铅乳酸菌的筛选鉴定及体内外吸附性能研究摘要即使在较低的浓度下，铅对人体

4、以及其他的有机体都可以产生毒性效应，人体主要通过污染的空气、烟尘、饮水、饮食(污染地区的动物内脏、贝类、蔬菜)摄入铅。影响中枢神经系统的正常功能，通过影响脂质的氧化作用影响生物膜的功能，对人类具有生殖毒性．破坏其正常生理代谢。微生物细胞的细胞壁含有多糖、蛋白质和脂质，具有结合重金属的功能部位，藻类、细菌、真菌、酵母菌都有吸附金属的潜力。所以乳酸菌可以应用于重金属的清除研究中。探讨了电感耦合等离子体发射光谱4义(ICP—OES)a,]定不同食品中铅含量的方法，结果表明，该方法检出限为O．002mg／L，加标回收率为96．

5、50"--'104．O％，变异系数为1．64％，适合测定重金属铅。测定结果表明肉类、鱼虾类共18中样品中铅检出率为83．33％，其中鸡肉、羊肉、鸡肝、虾、蛤蜊、扇贝中铅含量分别为O．4263、O．7706、O．7161、O．464、0．4541、0．7051mg／kg．高于标准限量。长期消费或过量食用，会对人体健康造成损害。本研究筛选获得铅耐性乳酸菌，并将该乳酸菌应用于清除进入动物体内的铅。采集60份鸡的肠道内容物及排泄物样品，采用涂布平板技术在含铅浓度为200mg／L的MRS琼脂平板上分离铅抗性乳酸菌。共分离筛选到8

6、株具有较好铅抗性和吸附性的目的菌株，逐步提高平板中铅浓度为400mg／L、600mg／L，经过不断驯化，可耐受最高铅浓度为800mg／L。选择大肠杆菌0157为对照菌株测定铅抗性菌株体外吸附效果，其中JTl菌株体外清除铅能力最高为66．95％。JTl菌株在含2％CaC03MRS琼脂平板上出现溶钙圈，初步判定有酸产生，通过菌株在MRS琼脂平板上的菌落特征、形态观察、16SrDNA序列分析等方法证明，所得JTl菌株与屎肠球菌(Enterococcusfaecium)同源性为97％。一系生理生化特征显示，该菌株可以在10～6

7、0℃条件下生长、pH3．5～9．6范围内生长良好、耐受6．5％NaCl、0．8％胆盐、1％胰蛋白酶，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏茵均有抑制性。使用已分离鉴定的鸡源肠球菌进行体内除铅作用试验。选用体重为20±29雄性小鼠为试验动物，应用含铅浓度为300mg／L饮用水建立铅中毒模型，结果显示，饮用水和饲料中铅含量分别为O．534mg／L、0．7899／g：造模20天后造模组小鼠全血浓度分别为6．8847，7．081，7．1007mg／L，造模组明显高于对照组。骨骼和肝脏中铅浓度最高分别为9661．3ng／g和1138

8、．76ng／g，表明铅主要在骨骼和肝脏中蓄积。在试验过程中，试验组和1万方数据青岛农业大学硕士专业学位论文摘要对照组中饮水量总量、进食饲料利用率、体重差异不显著(P>O．05)。造模成功后进行体内清除试验，，r1发酵液浓度为1×109cf-iffmL，通过投给量分别为0．1、O．2、O．3mL的仃1菌液进行体内除铅试验。结果显示，