雷公藤内酯醇、顺铂抑制膀胱癌t24细胞的协同效应及其机制研究

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1、隶。初大·磐硕士学位论文万方数据雷公藤内酯醇、顺铂抑制膀胱癌T24细胞的协同效应及其机制研究万方数据SynergisticanticanceractivityoftriptolidecombinedwithSynerglStlCancanceracuoltrlptolideCOmDineClWlthcisplatinonbladdercarcinomainvitroandinvivo．AThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicineBYCaiLong-

2、junSupervisedbyAssociateProf．ZhangGu·tianMedicalCollegeofSoutheastUniversityMay2012万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其它人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：排日期：坤东南大学学位论文使用授权

3、声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：秘导师签名：衄期：筮丛生哆万方数据中文摘要雷公藤内酯醇、顺铂抑制膀胱癌T24细胞的协同效应及其机制研究研究生：蔡龙俊导师：张古田东南大学医学院摘要目的探讨雷公藤内酯醇(tfiptolide，TPL)、顺铂(cisplatin，CD

4、DP)对人膀胱癌细胞的体内、外抑制效应，分析TPL和顺铂之间的联合作用，探讨相关机制。方法在体外以人类膀胱癌T24细胞株为研究对象，在不同浓度的雷公藤内酯醇及顺铂单独或联合作用下观察细胞生长状态和凋亡比例，比较不同药物浓度组合对T24细胞的抑制作用，并计算雷公藤内酯醇和顺铂的联合作用指数(combinationindex，CI)和剂量降低指数(Dosereductionindex，D对)；应用蛋白质免疫印迹检测法(Westernblot)检测TPL作用于T24膀胱癌细胞2h后AKT总蛋白及其磷酸化蛋白和24h后凋亡相关蛋I兰tCaspase．3、Bcl

5、．2的表达水平。建立T24膀胱癌细胞裸鼠异种移植瘤模型，观察雷公藤内酯醇和顺铂对肿瘤生长的作用及药物的毒副作用。通过组织切片HE染色法观察两种药物对T24膀胱癌皮下移植瘤病理学形态的影响。免疫组化染色法检测雷公藤内酯醇和顺铂治疗后膀胱癌细胞bcl．2、caspase．3、caspase一8的表达。评价两种药物的抑瘤作用及其联合用药时的协同作用。结果体外细胞生存实验显示雷公藤内酯醇和顺铂对膀胱癌T24细胞的生长抑制作用呈剂量依赖性，TPL和顺铂的24小时半数有效抑制浓度IC50分别为25．49ng／ml，3．91ug／ml。联合应用两种药的结果表明：TP

6、L2ng／ml和顺铂0．625ug／ml联合应用时CI为0．31，表现为强协同作用，TPL和顺铂的DRl分别为9．9和4．9。TPL4ng枷和顺铂1．25ug／ml联合应用时CI为O．35，表现为强协同作用，TPL和顺铂的DRl分别为8．6和4．2。TPL8n咖l和顺铂2．5ug／ml联合应用时CI为0．42，表现为高度协同作用，TPL和顺铂的DRl分别为7．2和3．6。TPL16ng／ml和顺铂5ug／ml联合应用时CI为0．66，表现为中等协同作用，TPL万方数据东南大学硕士学位论文和顺铂的DRl分别为4．5和2．3。TPL32ng／ml和顺铂10

7、ug／ml联合应用时CI为0．8l，表现为低度协同作用，TPL和顺铂的DRl分别为3．7和1．9。TPL64ng／ml和顺铂20ug／ml联合应用时CI为1．2，表现为拮抗作用，TPL和顺铂的DRl分别为2．5和1．3。Westernblot结果表明：64ng／mlTPL作用于膀胱癌T24细胞，与对照组相比，促凋亡蛋白Caspase3表达量上调、抗凋亡蛋白Bcl2表达量明显下降，AKT总蛋白表达无变化，但其磷酸化蛋白P．AKT表达量下降。裸鼠肿瘤模型研究发现，与对照组相比，TPL组、顺铂组可明显抑制T24荷瘤裸鼠皮下移植瘤在体内的生长，抑制率分别为：5

8、4．68％、67．35％。联合组抑制率为86．73％，两种药物联合应用时表现为协同作用。常规组