雷公藤内酯醇联合紫杉醇对人卵巢癌耐顺铂细胞株体外活性影响及机制的研究

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1、南昌大学硕士学位论文雷公藤内酯醇联合紫杉醇对人卵巢癌耐顺铂细胞株体外活性影响及机制的研究姓名：朱四红申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：谭布珍20120529摘要目的研究雷公藤内酯醇(triptolide，TP／TL)联合紫杉醇对人卵巢癌耐顺铂细胞株(COCl／DDP)的体外活性的影响及其机制。方法1、MTT法检测紫杉醇对COCl／DDP细胞增殖的影响：设空白对照组、0．391xg／ml、0．78I．tg／ml、1．56p,g／ml、3．13p咖l、6．25p．g／ml、12．51．tg／ml、251xg／ml、50rtg／ml的紫杉醇组【】】、调零组。

2、利用四甲基偶氮唑盐(MTT)k匕色法检测各孔细胞的光吸收值(OD值)，通过OD值可分析，不同浓度的紫杉醇作用于COCI／DDP细胞24小时后对COCl／DDP细胞增殖的影响，并计算各组的细胞生长抑制率。2、MTT法检测雷公藤内酯醇联合紫杉醇作用COCl／DDP细胞24、48、72小时后对细胞增殖的影响：设空白对照组、紫杉醇组(3．13ug／m1)、低浓度雷公藤内酯醇组(3ng／m1)、中浓度雷公藤内酯醇组(10ng／m1)、高浓度雷公藤内酯醇组(50ng／m1)[21、紫杉醇+低浓度雷公藤内酯醇、紫杉醇+中浓度雷公藤内酯醇、紫杉醇+高浓度雷公藤内酯醇、调零组。

3、利用MTT比色法检测各孔细胞的OD值，计算出各组药物对COCl／DDP细胞作用24、48、72小时后的细胞生长抑制率，利用金氏公式计算两药的合用指数(q)分析两药联合应用的效果：q=E(AB)／[EA+(1．EA)×EB]，其中E(AB)为两药合用的抑制率，EA和EB为各药单用时的抑制率，q=0．85--1．15表示两药作用相加；q>1．15表示两药作用协同；q<0．85表示两药作用拮抗pJ。3、透射电子显微镜观察雷公藤内酯醇联合紫杉醇作用于COCl／DDP细胞24小时后的超微结构变化：设空白对照组、雷公藤内酯醇组(10ng／m1)、紫杉醇组(3．131．tg

4、／m1)、雷公藤内酯醇联合紫杉醇组，各组分别作用于COCl／DDP细胞24小时后，通过透射电子显微镜观察细胞超微结构的改变。4、流式细胞仪检测雷公藤内酯醇联合紫杉醇作用于COCl／DDP细胞24小时后各细胞周期的细胞所占比例及细胞凋亡情况：设空白对照组、雷公藤内酯醇组(10ng／m1)、紫杉醇组(3．13p,g／m1)、雷公藤内酯醇联合紫杉醇组，各组分别作用于COCl／DDP细胞24小时后，用流式细胞仪检测各组各细胞周期的细胞所占比例及细胞凋亡情况。摘要5、免疫组化检测雷公藤内酯醇联合紫杉醇作用于COCl／DDP细胞24小时后细胞Caspase．7蛋白的表达情

5、况：设空白对照组、雷公藤内酯醇组(10ng／m1)、紫杉醇组(3．1399／m1)、雷公藤内酯醇联合紫杉醇组，分别作用COCl／DDP细胞24小时后，离心固定，并按常规方法制备石蜡块，用免疫组化ElivisionTMplus法检测各组细胞Caspase．7蛋白表达情况。结果1、紫杉醇对COCl／DDP细胞增殖的影响：不同浓度的紫杉醇对COCl／DDP细胞有明显的增殖抑制作用，且抑制作用随着紫杉醇浓度的增加而增强，存在明显的剂量依赖性(P<0．05)。2、雷公藤内酯醇联合紫杉醇对COCl／DDP细胞增殖的影响：雷公藤内酯醇联合紫杉醇对COCl／DDP细胞的抑制作

6、用强于其各自单用对COCl／DDP细胞的抑制作用(P<0．05)，随着雷公藤内酯醇浓度的增加其抑制作用增强(P<0．05)，存在剂量．时间依赖性(P<0．05)。各联合用药组作用于COCl／DDP细胞24小时后，合用指数分别为1．16、1．23、1．17；48小时后合用指数分别为0．96、1．02、1．11；72小时后合用指数分别为O．93、O．95、1．11。根据金氏公式可以推测，两药合用24小时后的作用效果表现为协同作用；两药合用48、72小时后的作用效果表现为相加作用。3、雷公藤内酯醇联合紫杉醇对COCl／DDP细胞超微结构的影响透射电子显微镜下可见空白

7、对照组COCl／DDP细胞形态正常，细胞核为卵圆形，染色质丰富；雷公藤内酯醇组、紫杉醇组、雷公藤内酯醇联合紫杉醇组均可见到COCl／DDP细胞细胞膜表面微绒毛消失，线粒体增多、内质网扩张，细胞膜皱缩，细胞核固缩、碎裂、溶解等凋亡样改变。4、雷公藤内酯醇联合紫杉醇对COCl／DDP细胞的细胞周期和细胞凋亡率的影响雷公藤内酯醇组、紫杉醇组、雷公藤内酯醇联合紫杉醇组的凋亡率均高于空白对照组(P<0．05)；雷公藤内酯醇联合紫杉醇组对COCl／DDP细胞的凋亡率高于其各自单用组(P<0．05)；雷公藤内酯醇组的凋亡率高于紫杉醇组(P

8、中Gl期的比例高于其余各组(P