雷公藤内酯醇抑制人神经胶质母细胞U87细胞增殖和侵袭的作用及机制

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写沙括移＼’签字日期：沙涉年‘月萝日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌

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3、于复发，患者如果不接受治疗平均生存期仅几个月。目前临床上对神经胶质瘤采取手术、放疗、化疗、免疫等手段进行综合治疗，但患者预后不佳。侵袭是神经胶质瘤的标志性恶性生物学特性，也是神经胶质瘤预后差的重要原因。神经胶质瘤的侵袭受到多机制的调控，其中核因子v,B(NF一1cB)家族中P65的表达与神经胶质瘤的侵袭性具有显著相关性，激活NF．出可促进CB和MMP．9转录，增强水解细胞外基质能力促进侵袭进程。因此NF．KB可以为抑制神经胶质的侵袭提供一个作用靶点。雷公藤内酯醇(triptolide)是从传统中草药中提取得单体化合物，临床上常作为免疫抑制剂治疗免

4、疫系统疾病。近来研究发现雷公藤内酯醇对神经胶质瘤细胞具有抑制增殖、诱导凋亡的作用，但是对其是否具有抑制侵袭的作用还不得而知。本研究拟对triptolide处理过的神经胶质瘤细胞株U87进行检测，观察triptolide对U87细胞的增殖及侵袭能力的影响，并进一步研究triptolide抗侵袭作用的可能机制，初步探讨NF．rB信号通路与triptolide抗神经胶质瘤作用的关系，为将来把tfiptolide开发成为抗神经胶质瘤的药物提供理论基础。方法：1．通过甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定雷公藤内酯醇处理后U87细胞增殖抑制率；2．划痕实验和体外

5、transwell小室模型检测雷公藤内醣醇对U87细胞迁移能力和侵袭能力的影响；3．Real．TimePCR分别检测雷公藤内酯醇对U87细胞的组织蛋白酶B(CathepsinsBCB)、基质金属蛋白酶9(MMP．9)的mRNA转录水平的影响：4．蛋白印迹法检测雷公藤内酯醇对U87胶质瘤细胞的CB、MMP．9和p65蛋白活性的影响。11摘要结果：1、在U87细胞上雷公藤内酯醇以剂量．效应方式抑制胶质瘤细胞增殖，其ICs0值是25．36飕·L～。2、雷公藤内酯醇可减弱U87胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力，划痕实验；72h后对照组迁移细胞数45a：3个，且

6、细胞形态无改变，生长良好。雷公藤内酪醇组72h迁移细胞数11土2个细胞伪足变短，活力下降。Transwell侵袭实验：迁移穿过基质胶与滤膜侵袭入下室的U87细胞数为：对照组平均102．5士3．0个，雷公藤内酯醇组平均55．4士2．7个，雷公藤内酯醇作用后U87胶质瘤细胞的侵袭能力显著下降(P<0．05)，有显著性差异。3、RealTimePCR：藤内酯醇处理24h后恶性胶质瘤U87胶质瘤细胞的CB、MMP一9基因的mRNA的表达较空白对照组均明显下降。CB和MMP．9的转录明显受到抑制，CathepsinsB基因和MMP．9基因的2-zxacT值

7、分别是O．64和0．28(P<0．05)4、蛋白印迹法：24h后空白对照组相比雷公藤内酯醇组的p65蛋白活性明显被抑制，同时MMP．9、CB的蛋白水平也明显下降。结论：1．在体外，triptolide能抑制神经胶质瘤的增殖和侵袭。2．Triptolide抗神经胶质瘤侵袭的作用可以通过抑制p65蛋白活性来抑制NF．r．B的转录活性，继而下调CB基因及MMP一9基因的表达，降低神经胶质瘤细胞迁移和水解细胞外基质的能力，阻碍肿瘤细胞迁移来实现。关键词：雷公藤内酯醇；胶质瘤；侵袭；核因子NF．rd3111垒!巡一ABSTRACTobjective：Gli

8、omaisthehighestmalignanttypeofintracalvariumtumorwhichhaslrlVaSlVegr