盐酸甜菜碱对hhcy大鼠脑组织和原代海马细胞损伤的保护作用及机制研究

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时间:2019-02-28

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1、万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·4符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·7前言。⋯⋯⋯⋯⋯⋯.....。.⋯⋯..”.”..⋯⋯⋯.””⋯⋯·····⋯⋯⋯·”·””⋯⋯⋯⋯”””””””·8刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”第一部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·12材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-·

2、12结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29第二部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·48参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯¨50综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯¨54万方数据致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。62攻读学位期问发表的学术论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。63原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..64万方数据泰山医学院硕士学位论文盐酸甜菜碱对HHcy大鼠脑组织和

4、原代海马细胞损伤的保护作用及机制研究研究生:张伟专业:药理学导师:高允生教授中文摘要目的研究盐酸甜菜碱(Bet)对高同型半胱氨酸血症(HHcy)大鼠脑组织和原代海马细胞损伤的保护作用及其机制。通过对HHcy大鼠血浆及脑组织匀浆中的SOD活性、LDH活性、MDA、NO及GSH含量进行测定,HE染色观察HHcy大鼠脑组织形态学等方法研究Bet的保护作用。体外实验通过检测细胞生长抑制率和凋亡率,采用试剂盒测定细胞上清液SOD活性、MDA含量、LDH活性和细胞凋亡,WesternBlot检测细胞凋亡相关蛋白Bel一2和Bax的表达,探讨Bet拮抗Hcy致大鼠原代培养

5、海马细胞损伤的作用机制。方法1Bet对HHcy大鼠脑组织的保护作用:采用2%蛋氨酸饲料喂养Wistar大鼠,制备大鼠高同型半胱氨酸血症模型。分组如下:正常对照组(标准饲料,生理盐水)、模型组(HHcy)(高蛋氨酸饲料,生理盐水),盐酸甜菜碱高、中、低浓度组(高蛋氨酸饲料,甜菜碱剂量200、100、50mg/Kg),大鼠尾部取血离心取血清,检测大鼠血清同型半胱氨酸的含量。灌胃Bet60天后麻醉处死,检测血浆及脑组织匀浆SOD、MDA、NO、GSH、LDH及NO水平,HE染色观察大鼠脑组织形态学变化。2Bet对原代培养大鼠海马细胞的保护作用:采用低浓度胰蛋白酶消

6、化静茕提取海马细胞,高糖DMEM培养原代海马细胞的方法。原代海马细胞分组如下:jr常对照组:高糖DMEM培养基;同型半胱氨酸(Hey)损伤组(模型组):16mmol/LHcy;盐酸甜菜碱高中低浓度组:16mmol/LHcy+12.5mmol/LBet(25mmol/LBet,50mmol/LBet)。甜菜碱各组在Hey损伤前Bet预处理12h,Hcy作用12h,采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化,MTT法检测细胞的增殖。药物对细胞凋亡的影响采用流式细胞仪检测凋亡率及试剂盒细胞上清液中LDH的释放,氧化应激指标采用比色法检测万方数据泰山医学院硕士学位论文细胞上

7、清液中SOD活性和MDA含量。WesternBlot检测凋亡相关蛋白Bcl一2及Bax的表达。结果1Bet对HHcy大鼠脑组织的保护作用:利用高蛋氨酸饲料饮食建造大鼠高同型半胱氨酸血症动物模型。利用盐酸甜菜碱灌胃治疗,结果盐酸甜菜碱组血浆及脑组织SOD、MDA、NO、GSH的变化与模型组比较均变化显著(P<0.01);HE染色结果表明甜菜碱组与模型组相比,模型组脑组织病理状态明显得到改善,明显保护受损的脑组织。2Bet对原代培养大鼠海马细胞的保护作用:建立体外培养海马细胞的方法并且鉴定成功,同型半胱氨酸损伤浓度为16mmol/L,盐酸甜菜碱的保护浓度分别为1

8、2.5、25、50mmol/L,流式细胞仪检测细胞凋

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