重组人p53腺病毒联合顺铂对人卵巢癌铂类耐药细胞coc1ddp的敏感性分析及相关机制研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterStudyofSensitivityandRelatedMechanismsforRecombinantHumanAdenovirusp53CombinedwithCisplatinActingonPlatinum--resistantHumanOvarianCancerCellsCOC1／DDPByJingboWeiSupervisor：DongmeiHuang一DepartmentofObstetricsandGyn

2、ecologyTheSecondAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay，2014学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：伍碍波日期：卜，’年，月沙日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州

3、大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者．硒寺；搜日期．弘惟歹月矽日摘要重组人p53腺病毒联合顺铂对人卵巢癌铂类耐药细胞COCl／DDP的敏感性分析及相关机制研究研究生位静波导师黄冬梅郑州大学第

4、二临床学院河南郑州450014背景和目的目前，对化疗药物耐药仍然是卵巢癌治疗失败的主要原因。在顺铂联合紫杉醇的基础方案上添加新的二线化疗药物，耐药或复发患者的响应率只有不到30％。另外，随之增加的药物毒性反应及不良反应致使患者的耐受性和依从性均降低。由此，针对耐药基因的靶向治疗就凸显优势。由于近80％的卵巢癌患者存在p53基因的突变，所以大部分的基因治疗都聚焦于肿瘤抑癌基因p53。但是使用基因转导技术将野生型p53再次导入肿瘤细胞后，携带野生型p53的肿瘤细胞和突变型p53的肿瘤细胞哪个凋亡更明显，国内外的研究结果似乎并不一致，也有

5、研究报道p53的基因治疗与细胞内p53的状态无关。近期有研究认为关于耐药的基因诊断有可能预测预后，但单独的分子靶向治疗或许不足以改善晚期卵巢癌患者的预后。本实验在不考虑p53状态的情况下，利用重组人p53腺病毒(rAd-p53)联合顺铂作用于人卵巢癌铂类耐药细胞系COCl／DDP，观察其对耐药细胞生长的影响。p73是p53家族成员之一，2个不同的启动子转录生成促凋亡的TAp73和抗凋亡的ATAp73亚型，不同亚型在细胞中的表达比决定了细胞生死命运。现已证实显性负性的ANp73]巨型与肿瘤的化疗耐药密切相关，并能通过反馈回路抑制野生型

6、p53和TAp73的促凋亡作用。本研究从基因水平使用荧光定量PCR技术检测了rAd．p53、顺铂及联合用药作用下p73的所有N端亚型表达情况，探讨各亚型在耐摘要药人卵巢癌细胞凋亡中的作用。方法将人卵巢癌铂类耐药细胞COCl／DDP分成4组培养：对照组(不加药)；rAd-P53组(MOl400)；顺铂组(12ug／m1)；联合用药组(顺铂12ug／ml+rAd-p53400MOI)。MTT法测定不同浓度梯度下顺铂及rAd-p53对COCl／DDP细胞的-4570值，比较不同处理组的细胞生长抑制率。流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。使用荧

7、光定量PCR技术半定量检测不同处理组p73所有N端亚型mRNA的相对表达量。么七田当口，R(1)顺铂组、rAd-p53组、联合用药组24d,时细胞抑制率分别是46．21+6．31％、13．484-2．49％、64．80i6．15％，差异有统计学意义(p217．328，P=-0．000)，两两比较结果显示各组间的差异均有统计学意义(尸<0．05)。(2)联合用药组、顺铂组、rAd-p53组及对照组124,时细胞凋亡率分别为19．55+1．13％、14．96+1．80％、7．71士1．46％、6．23+0．98％，差异有统计学意义(庐6

8、1．688，P=0．000)。两两比较结果：联合用药组与单药组比较差异均有统计学意义(P<0．05)，而rAd—p53组与未加药组之间的差异无统计学意义(P>O．05)。(3)荧光定量PCR结果：不同处理组中野生型p53的mRNA相对