肌动蛋白解聚因子在小鼠卵泡的发育过程中的表达与调节

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1、东北农业大学硕士学位论文肌动蛋白解聚因子在小鼠卵泡的发育过程中的表达与调节姓名：王清泉申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：倪华20090620摘要摘要肌动蛋白解聚因子家族是一类广泛存在于真核细胞中的肌动蛋白结合蛋白，家族分子通过增加肌动蛋白丝解聚作用切断微丝，增加G-actin的浓度，促进细胞骨架重组，进而影响诸如细胞迁移、细胞增殖、细胞凋亡等重要的生理功能。哺乳动物中，肌动蛋白解聚因子家族成员包括ADF（destrin简称Dstn），非肌肉型Cofilin（n-cofilin或Cofilin1）和肌

2、肉型的Cofilin（m-cofilin或Cofilin2）。卵泡发育是生殖过程中的重要事件，卵泡发育异常将导致排卵异常或失败，最终引发不育。目前关于AC蛋白家族在哺乳动物卵泡中的表达还没有报道。本研究采用原位杂交、实时定量PCR及免疫荧光技术，结合小鼠性成熟模型、激素处理诱导的卵泡发育模型，研究Dstn、Cofilin1和Cofilin2在小鼠卵泡发育过程中的表达。在PMSG诱导的卵泡发育过程中，Cofilin1mRNA在注射PMSG0h，6h，12h和24h卵巢中正发生增殖的次级卵泡颗粒细胞上表达，提示C

3、ofilin1可能与颗粒细胞的增殖有关。在PMSG/HCG诱导的卵泡发育过程中，Cofilin1mRNA在注射HCG12h，18h，24h和48h卵巢中成熟卵泡的颗粒细胞和黄体上表达。实时定量PCR结果表明，Cofilin1mRNA在排卵阶段卵泡的颗粒细胞中表达量较高，提示Cofilin1可能参与颗粒细胞分化，有助于排卵和黄体生成。小鼠性成熟卵巢中，Cofilin1mRNA表达情况与激素处理模型中基本一致。原位杂交结果发现，Cofilin1mRN在卵母细胞中有表达。免疫荧光进一步证实，Cofilin蛋白定位在

4、卵母细胞核内染色体附近。提示Cofilin可能与染色体功能有关。在PMSG诱导的卵泡发育过程中，DstnmRNA在注射PMSG0h，6h，12h，24h和48h卵巢中各阶段卵泡的卵泡膜上表达，提示Dstn可能与卵泡膜功能有关。在PMSG/HCG诱导的卵泡发育过程中，DstnmRNA在注射HCG0h，6h，12h，18h卵巢的卵泡膜上表达。注射HCG24h，48h的卵巢中已有黄体形成，DstnmRNA在黄体化的颗粒细胞上表达。提示Dstn可能参与黄体形成过程。以上各时期卵巢的各阶段卵泡中，Cofilin2mRN

5、A的表达十分微弱。我们的结果表明，Cofilin1和Dstn可能在小鼠卵泡发育过程中起重要作用。关键词：肌动蛋白解聚因子卵巢卵泡发育IAbstractAbstractTheactin-depolymerizationfactor/cofilinfamilyisaclassofactin-bindingproteinwhichexistsineukaryoticcell,theycutoffthemicrofilamentsbyincreasingthedepolymerizationofactinfilame

6、nts,increasetheconcentrationofG-actintorearrangementthecytoskeleton,inturntheyaffectmanyimportantphysiologicalfunctionssuchascellmigration,cellproliferationandapoptosis.Inmammal,actin-depolymerizingfactor/cofilinfamilyincludeactindepolymerizingfactor(destri

7、n/Dstn/ADF),non-musclecofilin(cofilin1)andmusclecofilin(cofilin2).Folliculardevelopmentisanimportantcaseinreproductionprocess,folliculardysplasiawillleadtoovulationabnormallyorfailure,eventuallybringaboutinfertility.Untilnow,thereisnoarticleabouttheexpressi

8、onandregulationoftheactindepolymerizationfactor/cofilinduringfolliculardevelopmentinmammal.Thepresentstudyuseinsituhybridization,realtimePCRandimmunofluorescencetoinvestigatedtheexpressionandregulation