lmo3 mrna在小鼠脑发育过程中的表达

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1、LMO3mRNA在小鼠脑发育过程中的表达作者：惠玲，蔡文琴，纪华，吕同德，杨金升，赵治华【关键词】LMO3；原位杂交组织化学；小鼠；脑　　【Abstract】AIM:ToexaminethelocalizationofneuronalspecifictranscriptionfactorLMO3mRNAinthedevelopmentofcentralnervoussystem(S)ofthemice.METHODS:RealtimefluorescencequantitativeRTPCR(FQRTPCR)andinsituhybridizationhistochem

2、icalstainingmethodRNA.RESULTS:TheFQRTPCRshoRNAostremainedthesameleveluntiladult.LMO3mRNAexpressionbryonicstages(E10.511.5d),butnotdetectedatotherpartsofembryo.Thehighlevelinbrainid(E15.5d)andlate(E17.5P0d)embryonicbrainandshoent,LMO3mRNARNAexpressionofP14P60doreregionalthanthatofP7d.Thes

3、ignalofLMO3mRNAainlylocatedindifferentnucleusclonyandshoentduringembryonicperiodandpostnataldifferentiationandspecificationofspecificbrainregions.　　【Keyistry;mice;brain　　【摘要】目的：研究不同发育时期小鼠脑内LMO3的表达.方法：采用以SYBRGreenI为荧光染料的定量RTPCR及以地高辛标记的cRNA为探针的原位杂交组织化学法检测LMO3基因在小鼠脑发育过程中的表达.结果：FQRTPCR结果表明，L

4、MO3在出生前高表达，P7d后表达水平急剧下降，至成年都维持在一个较低的水平.LMO3mRNA在小鼠胚胎期E10.5d即有表达，但仅限于整个脑泡组织内，胚体其他区域均为阴性；E11.5d脑区信号逐渐加强，无核团及脑区的特异性，胚体其他部分仍为阴性；E15.5～P0d期LMO3阳性信号在几乎所有观察的脑区均有广泛而较强的着色；P7dLMO3阳性信号较出生前变弱，分布逐渐集中；P14～P60dLMO3mRNA表达范围较P7d逐渐缩小，但仍有广泛表达，阳性信号主要集中于不同核团，表达有强弱之分.结论：LMO3基因可能与小鼠出生前脑的发育以及出生后特定脑区神经元的特化及特性维持

5、有关.　　【关键词】LMO3；原位杂交组织化学；小鼠；脑　　0引言　　多巴胺相关转录因子DAT1(GenBank登录号：AF258348)又称LMO3，是我们获得的星形胶质细胞在DA作用下发生反应性变化时上调表达的基因之一［1］.LMO家族由4个成员组成，即LMO1～LMO4.我们以往的研究证实LMO3mRNA在成年大鼠和小鼠的中枢神经系统（S）中分布广泛，提示LMO3基因在S有重要作用［2］.本试验采用实时荧光定量RTPCR方法及原位杂交组织化学的方法对LMO3mRNA在小鼠脑发育过程中的表达变化进行了研究，以探讨LMO3在神经系统发育中的作用.　　1材料和方法　　1

6、.1材料成年昆明种雌雄小鼠由本院实验动物中心提供.于每日18：00按雌雄1∶1合笼，次日晨取出，检查雌鼠的阴道口有无阴栓，有阴栓者既定为孕期0d(E0d)，出生当日为生后1d(P0)，依此类推.分别取E10.5，E11.5,E15.5，E17.5，P0，P7，P14，P30，P60d的小鼠，每组5只，进行原位杂交检测并提取总RNA后用于荧光定量RTPCR试验.地高辛标记小鼠LMO3cRNA寡聚核苷酸探针由湖北武汉博士德公司合成.　　1.2方法　　1.2.1荧光定量RTPCR采用Tri201试剂提取制备总RNA，测定A260nm对RNA进行准确定量.取2μg总RNA，经M

7、MLV逆转录酶催化合成cDNA第一链，以此为模板进行荧光定量PCR扩增，荧光介质选用SYBRGreenI，根据同时扩增的标准曲线，计算出各样本的初始拷贝数，结果以LMO3copies/G3PDHcopies表示LMO3mRNA在各组起始RNA中的相对含量.在PCR后进行融解曲线分析以确定得到的产物是否为目的产物，温度以0.2℃/s的速率从55℃缓慢递增到100℃.同时将反应产物置20g/L琼脂糖凝胶电泳进一步观察扩增产物的特异性.　　1.2.2原位杂交组织化学全胚胎原位杂交新鲜取材的鼠胚(E10.511.5)用PBS洗2次，入4%多聚甲醛