肾络通对梗阻性肾病大鼠炎性介质表达的影响

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目录JIllIJIIlUJIIIIIIIlllIIIIIIIIJY2583291中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17研究论文肾络通对梗阻性肾病大鼠炎性介质表达的影响引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18第一部分“毒"、“瘀”伤肾机制及关联1毒与肾病⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯192瘀与肾病⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯223毒瘀相关在肾病中的作用机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯254毒瘀病机学说的临床意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯275小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯286参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28第二部分肾络通对梗阻性肾病大鼠肾脏组织病理形态学的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29日lJ蔷⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．29结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45第三部分肾络通对梗阻性肾病大鼠MCP．1、TNF．Q、IL．1B、iNOS等炎性介质表达的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．48材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60 小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66第四部分肾络通对梗阻性肾病大鼠血清醛固酮及SGK．1表达的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7一l耳U吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71结果⋯，⋯一．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．。群附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯75附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯77讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯78小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯85参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯85第五部分肾络通对梗阻性肾病大鼠Q．SMA及NF．KB表达的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯991日lJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯93附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯94附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯96讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯97小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯104参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．104结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯110综述一炎性损伤在梗阻性肾病小管间质损害中的作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯．111综述二中医药防治梗阻性肾病的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．130致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯148个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯149 中文摘要肾络通对梗阻性肾病大鼠炎性介质表达的影响摘要由于先天性或获得性泌尿系梗阻所致的梗阻性肾病是急性或慢性肾功能衰竭的常见原因之一，也是难治性反复发作的尿路感染的常见诱发因素。造成慢性泌尿系梗阻的机制非常复杂，其中包括血液动力学改变、炎性介质、血管活性物质、氧化应激等因素的共同参与，最终导致肾脏损伤及肾功能衰竭。肾脏病的发生与肾素．血管紧张素．醛固酮系统(Renin．angiotensin．aldosterone，m蚣S)有密切关系，目前对血管紧张素II(angiotensinII，AnglI)的研究较多，其通过转化生长因子．13(Transforminggrowthfactor-B，TGF．13)途径促进肾间质纤维化(Renalinterstitialfibrosis，RIF)的机制已经比较明确，应用血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensinconvertingenzymeinhibitors，ACEI)及血管紧张素II受体阻断剂(angiotensinIIreceptorblockers，ARB)后可减轻慢性肾脏病患者肾脏结构和功能的损伤，但仍有不少患者，即便足量的ACEI及ARB治疗亦未能有效，说明有其他因素如炎性损伤、氧化应激的参与。已有的研究表明，炎性损伤在慢性疾病持续进展中发挥重要作用，故抗炎治疗对于慢性疾病的预后有重要意义。这种炎性损伤并非单纯由外界感染所致，而是以内源性炎性损伤为主，且与RIF的持续进展密切相关，炎性介质在其中的作用也得以重视。有研究指出炎性介质例如单核细胞趋化蛋白．1(monocytechemotacticproteinl，MCP．1)、白介素．113(Interleukin113，IL．113)、肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactorQ，TNF．Q)和诱导型一氧化氮合酶(inducednitricoxidesynthase，iNOS)是各种慢性肾脏疾病中引起肾脏炎症和纤维化的重要因素。随着对RAAS的深入研究，发现除了AngII外，醛固酮也可通过激活其下游效应介质血清糖皮质激素诱导蛋白激酶l(Serumandglucocorticoid．inducedproteinkinase1，SGK．1)及核转录因子KB(NuclearfactorKB，NF．KB)、氧化应激等多种途径导致肾脏炎性细胞浸润和细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)积聚，最终导致RIF的进展，故阻断醛固酮活化造成的炎性损伤对于减缓肾脏病的进展有重要意义。本次实验通过单侧输尿管结扎(unilateralureteralobstruction，uuo)建立梗阻性肾病间 中文摘要质纤维化实验动物模型，观察盐皮质激素受体阻断剂依普利酮和化瘀涤痰通络方肾络通煎剂对单侧输尿管梗阻大鼠炎性介质表达的影响，利用实时定量荧光聚合酶链式反应(Real．timepolymeraseChainReaction，Real—timePCR)、免疫组化、蛋白质印迹法(Westernblot)、酶联免疫吸附法(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)、放射免疫分析法等技术检测血清醛固胴、、血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶l；(Serumandglucocorticoid-inducedproteinkinasel，SGK．1)及MCP．1、TNF．Q、iNOS、IL．1B、核转录因子KB(NuclearfactorKB，NF—KB)和Q平滑肌激动蛋白(Q．smoothmuscleprotein,Ct．SMA)等指标的变化，从组织、分子、基因水平研究肾络通煎剂的作用机制，为中药治疗梗阻性肾病提供理论和实验依据。第一部分“毒”、“瘀一伤肾机制及关联简述了“毒”和“瘀”的概念、分类、形成机制、两者在肾病中的发病机制，以及毒邪和瘀血的相互影响、毒瘀互结在肾病中的作用、毒瘀相关的分子生物学基础及临床意义等内容。大量实验研究表明，肾问质纤维化是各种慢性肾脏疾病的病理表现和共同通路，而炎性损伤在肾间质纤维化的进程中是一种启动和诱发因素。现代医学研究表明，炎性细胞的浸润、炎性介质的释放、促纤维化细胞因子的表达等均可归属于中医“内毒致病”范畴，而细胞外基质在肾脏的积聚是“瘀”的表现，由此可见，以炎性损伤为特征的“毒”为起因，纤维化为表现的“瘀”为结果，二者交互错杂，导致和加重肾间质纤维化，且贯穿于肾脏病的整个病理过程。同时，也总结出“毒"和“瘀"可作为慢性肾脏病的基本病机。在临床上，肾脏病的进展与感染有密切关系，或因感染而诱发，或因感染而加重，且肾病患者易于感染，这种感染所致的炎性损伤在肾间质纤维化的进展中发挥着重要的作用，抗炎治疗可能是治疗靶点。“毒”、“瘀”病机学说的提出为临床治疗慢性肾脏疾病提供了理论依据，对于慢性肾病的进展可能有重要意义。第二部分肾络通对梗阻性肾病大鼠肾脏组织病理形态学的影响．方法：48只Wistar大鼠随机分为假手术组(Shamgroup)、UUO组(tmogroup)、依普利酮组(EPLgroup)、肾络通组(SETgroup)，每组12只。实验动物自由进食和饮水，温度条件控制在(22±2)℃。适应性饲养1WK后， 中文摘要除假手术组(Shamgroup)，其余大鼠按照1waiT的方法制备单侧输尿管梗阻模型。大鼠给以10％水合氯醛注射后，于左侧中腹部切开皮肤，游离左侧输尿管，分别在输尿管上1／3处和中1／3处用丝线结扎，切断输尿管，逐层缝合皮肤。假手术组仅将输尿管游离但不结扎离断。术后第3天肾脏组织病理显示炎性细胞浸润，第5日后肾间质胶原纤维沉积，术后第10天梗阻侧肾脏明显太子对侧，肾间质大量炎性细胞浸润以及胶原纤维沉积，肾小管上皮细胞变性、浊肿、脱落甚至坏死，肾小管部分萎缩，管腔闭塞或扩张，与文献报道相似，符合肾间质纤维化病理改变，模型复制成功。本次实验成功率为92％，UUO术后大鼠死亡5只，用备用大鼠补足。术后开始给药，依普利酮组给以依普利酮100mg／(kg．d)从饲料中加入，肾络通组给以肾络通煎剂26∥(k．d)入水瓶饮用，假手术组及UUO组给予等容量生理盐水饮用。均每天1次。连续干预10天。观察一般隋况。于实验结束时，称重，断头取血，分离血清，用于指标检测；取左侧(梗阻侧)肾脏称重，计算各组肾重／体重比值，进行肾脏组织HE、MASSON染色，观察组织病理学改变。数据资料结果使用SPSS13．0forwindows统计软件分析处理。各组数据比较前先进行正态性及方差齐性检验，满足正态性及方差齐性者，采用方差分析，多组比较采用单因素方差分析(One．wayANOVA)，组间比较采用LSD检验。数值变量以均数加减标准差(x±s)表示。显著性差异水平以0．05和0．Ol为标准。’结果：l各组大鼠一般情况比较实验中大鼠死亡5只，用备用大鼠补足。整个实验过程中假手术组大鼠一般情况良好：每日饮食、饮水量稳定，体重逐步增长，毛发有光泽，活动敏捷，对外界刺激反应灵敏。UUO术后1天，造模动物的进食量、饮水量、体重均有所下降。术后6天，UUO组大鼠整体状态欠佳：活动较前明显减少，毛发松散无光泽。与假手数组相比，造模动物体重不增反而下降。UUO手术10天后，造模大鼠体重增长缓慢，且与假手术组有显著性差异(尸0．05)，肾络通组血清醛固酮含量明显降低，有统计学差异(尸≮0．01)。2Real．timePCR检测SGK．1mRNA的表达与假手术组比较，UUO组中SGK．1mRNA表达明显增强。与UUO组比较，依普利酮及肾络通组SGK．1mRNA表达均显著下调。3WesternBlot检测SGK．1蛋白表达与假手术组比较，UUO组SGK-1蛋白表达明显上调。与UUO组比较，依普利酮组及肾络通组其表达均被下调，其中以依普利酮组下降更为显著。第五部分肾络通对梗阻性肾病大鼠及a．SMA及NF．KB表达的影响 中文摘要方法：动物分组、模型复制、给药方法同第二部分，共10天。实验结束时留取肾脏标本，采用免疫组化、WesternBlot检测伐．SMA及NF．id3蛋白表达。统计学方法同第二部分。结果：1，免疫组化检测各组大鼠NF．KB、Q—SMA表达假手术组NF．KB呈弱表达，主要表达于肾小管上皮细胞；UUO组NF．KB表达明显增强，近曲小管尤为明显；依普利酮组及肾络通组NF．KB表达范围及强度较UUO组均明显减弱。假手术组Q．SMA仅表达于血管，肾间质及上皮细胞未见表达；UUO组Q．SMA表达明显增强，以扩张的肾小管表达为甚，间质亦可见到阳性表达；依普利酮组及肾络通组Q—SMA局部呈中度表达，间质可见少量表达。2WesternBlot检测各组大鼠Q．SMA、NF．KB表达’与假手术组比较，UUO组Q．SMA、NF．KB蛋白表达明显上调，差异有统计学意义(尸≮O．01)。与UUO组比较，依普利酮组及肾络通组其表达均被下调，其中以依普利酮组下调更为明显，差异有统计学意义f氏0．01)。结论：”1“毒"和“瘀”是慢性肾病的基本病机，以炎性损伤为特征的“毒"为起因，以纤维化为表现的“瘀”为结果，二者相互关联、相互促进，导致和加重肾间质纤维化，且贯穿于肾脏病的整个病理过程。2结扎单侧输尿管复制肾间质纤维化实验动物模型，肾间质炎性细胞浸润及胶原成分显著增多。肾络通及依普利酮能显著减轻UUO诱导的肾实质损伤，减少炎性细胞浸润，延缓间质纤维化进展。3炎性损伤是梗阻性肾病的重要起始因素，炎性介质在其中发挥重要作用。其中，MCP．1、TNF．0【、IL．113及iNOS等炎性介质是慢性肾脏疾病中介导的肾脏炎症和间质纤维化的重要因子。肾络通和依普利酮能下调其表达，从而抑制梗阻性肾病中炎性损伤和炎性细胞浸润，进而延缓间质纤维化的进展。 中文摘要，4醛固酮可通过激活其下游效应介质SGK．1引起肾脏炎性损伤。肾络通和依普利酮能降低血清醛固酮含量，下调SGK．1mRNA和蛋白表达，从而进一步抑制梗阻性肾病炎性损伤和间质纤维化进展。5肾络通和依普利酮可以通过NF．KB通路，下调炎性介质表达，抑制信号传导，从而抑制细胞的表型转化，减轻肾脏炎性损伤，减缓肾间质纤维化的进展。关键词：中药；肾间质纤维化；炎性介质；盐皮质激素受体阻断剂；血清糖皮质激素诱导蛋白激酶1；核因子r,B；O【．平滑肌肌动蛋白 英文摘要EffectofShenluotongDecoctiononInflammatoryMediatorsinRatswithUnilateralUreteralObstructionABSTRACTObstructivenephropathyduetocongenitaloracquiredurinarytractobstructionisthefirstprimarycauseofacuteorchronicrenalfailure(CRF)andalsoamajorinducedcauseofurinarytractinfection．Themechanismofchronicurinarytractobstructionisverycomplicated，includinghemodynamicchanges，inflammatorymediators，vascularactivesubstances，oxidativestress，whicheventuallyleadtokidneydamageandrenalfunctionfailure．ThereisaclosedrelationshipbetweenrenaldiseaseandthesystemofRenin-angiotensin-aldosterone(凡蛆S)．Atpresent，thestudyofangiotensinII(AngII)ismore，andthemechanismthatAngIIthroughtransforminggrowthfactor-13(TGF—p)pathwaytopromoterenalinterstitialfibrosis(RIF)hasmoreclear．Applicationofangiotensinconvertingenzymeinhibitors(ACEI)and／orangiotensinIIblockersfARB)caninhibitthedamagetostructureandfunctionofchronicrenaldisease．Buttherearestillmanypatients．evenifadministrationofplentyofACEIandARBarenoteffective，indicatingthereareotherfactorssuchasinflammationinjury,oxidativestresstoparticipatethisprocess．Existingstudieshaveshownthatinflammatorylesionsplayanimportantroleintheprogressofchronicdisease，thereforeanti—inflammatorytherapyhasimportantsignificancefortheprognosisofchronicdiseases．Thisinflammatorydamageisnotcausedbyinfection，butitisendogenous，andcloselyrelatedtorenalinterstitialfibrosis．Moreover,inflammatorymediatorsplayanimportantroleintheprocessofrenalinterstitialfibrosis．StudieshavepointedoutthatinflammatorymediatorssuchasmonocytechemotacticproteinI(MCP．1)，Interleukinl13(IL-1p)，tumornecrosisfactor0【(TNF’a)，inducednitricoxidesynthase(iNOSlareimportantfactorsofinflammationandfibrosisinchronicrenaldisease．WiththestudyofRAAS，inadditiontoAngII，aldosteronecanalsobeactivatedbySerumand8 英文摘要glucocorticoid-inducedproteinkinaseI(SGK-1)，Nuclearfactorr．B(YF-1出)，oxidativestressandSOon，furthercauseinfiltrationofrenalinflammatorycellsandaccumulationofextracellularmatrix(ECM)，eventuallyleadingtot岫progressoftheRIF．Therefore，blockingactivatedaldosteronetoinhibitinflammatorycandelaytheprogressofchronicrenaldisease．Inourstudy,renalinterstitialfibrosisanimalmodelwasestablishedbyunilateralureteralobstruction(t；tJo)，andserumaldosterone，SGK-1，MCP-1，TNF-q，iNOS，IL-113，NF—v．Bandc【-SMAweredetectedbyReal-timePCR，immunohistochenicalmethod，Westemblot．TheeffectofmineralocorticoidreceptorblockerEplerenoneandChineseherbswasobserved，whetherCaninhibitetheexpressionofinflammatorymediatorsbyblockingaldosteronesecretion，futureinhibitecellphenotypetransformation，andprovidetheoreticalandexperimentalbasis．PartIMechanismandRelationshipofToxinandStasisonRenalInjury．"Toxin¨and”Stasis”werebrieflyintroducedwiththeconcept．classification，formationmechanism，theroleinthepathogenesisofkidneydisease，andinteractionwithstasisandtoxin，theroleofbothinkidneydisease，molecularbiologyandclinicalapplication．，Manyexperimentalstudyshowedthatrenalinterstitialfibrosiswaspathologicalchangeandcommonpathwayofavarietyofchronickidneydiseases，andinflammatorylesionswasaoriginalandinducedfactorinthisprocess．ModemmedicalstudieshaveshownthatinfiltrationofinflammatorycellsandtheexpressionofinflammatorymediatorsandinducingfibrosiscytokineswereattributabletotraditionalChinesemedicine‘‘endogenoustoxin”，howevertheaccumulationofextracellularmatrixinthekidneywasaperformanceof“stasis”，therefore“toxin’’wasthecausecharacterizedbyinflammationinjury，“stasis’’wastheresultcharacterizedbyrenalinterstitialfibrosis，andthesetwofactorswereinterrelatedandtheyinteracted、Ⅳimeachot．her，causedandaggravatedrenalinterstitialfibrosis，andrunthroughthewholepathologicalprocessofkidneydisease．Atthesametime，wealsosummedupthat‘‘toxinand‘‘stasis”canbeusedasthebasicpathogenesisof9 英文摘要chronickidneydisease．Inclinic，therewasaclosedrelationshipbetweentheprogressofkidneydiseaseandinfection，andkidneydiseaseswereinducedoraggravatedbyinfection，andnephropathypatientspronedtoinfection．Inflammationinjurycausedbyinfectionplayedanimportantroleintheprogressofrenalinterstitial．fibrosis，，andanti-inflammatorytherapymaybeatherapeutictarget．”Poison”．"Yu”pathogenesistheoryhaveprovidedthetheorybasisfortheclinicaltreatmentofchronickidneydisease，andhaveimportantsignificancefortheprogressofchronickidneydisease．Part]IEffectofShenluotongDecoctiononpathomorphologyintheRatswithObstructiveNephropathyMethods：48Wistarratswererandomlydividedintotheshamgroup(n=12)，UUOgroup(n=12)，EPLgroup(n=12)，SLTgroup(n212)．Ratswerefreetoeatanddrink，andtemperaturewascontroledinthecondition(22a：2)。C．Afteradaptivefeeding1WK，excepttheShamgroup’rats，theotherratswereestablishedmodelofunilateralureteralobstructionaccordingtothemethodof1waiT．Afteranesthesiawith10％chloralhydrate，theratswereslicedthroughtheleftmiddleabdominalskin，separatedtheleftureter，ligatedrespectivelyonureteral1／3andmiddle1／3ligationwithsilk，cutofftheureter，thensuturedinskinbylayertolayer．TheratsinShamgroupwereonlyseparatedtheleftureter，butnotligatedandcuredofftheureter．At3daysafteroperation，renalpathologyofmodelingratsshowedasignificantincreasewithinfiltrationofinflammatorycells，aswellasat5daysafteroperation，pathologicalchangesshowedrenalcollagendeposition，thereforethismodelwassuccessfullycopied．TheSuccessrateofthissurgerywas92％，andfiveratswerediedafterUU0operation．Ratsweresupplementedwithalternaterats．Afteroperation，theratsweretreatedwith100mg／kgEplerenoneinEPLgroupand269／kginSLTgroup；othersinshamandUUOgroupadministeredwiththesamevolumeofsalineonceaday．Atthe10dayaftersurgery，allratsweresacrificedandspecimensofbloodweregottodetectindexandleftki'dneywascuttobemeasuredtheindexofkidneyweight／body10 ．一．．叁查塑耋一—————●—●_—●-——-——_-_-_-__—_●__—_●●_-_----_——-___--__-_-●-_______●-—--—————————一一weight(KW／BW)．PartsofleftkidneywerepreparedrespectivelyforHEandMASSONstaining．ThedatawerecountedbySPSS13．0software．Beforecomparisonofeachgroup，testsofnormalityandhomogeneityofvarianceweregiven．Ifthedatacanachievesuchcriteria，theresultswereanalyzedwithOneway√6心OVA．Thedatawereexpressedasmean4-SD．A11resultsareconsideredsignificantatP<0．05andP0．05)。2各组大鼠肾组织病理形态学改变HE染色显示，假手术组肾脏结构基本正常，肾小管上皮细胞排列整 研究论文齐，无浊肿，间质无水肿，偶见炎性细胞浸润；UUO组肾间质大量炎性细胞浸润，肾小管明显扩张，上皮细胞变性、浊肿、脱落甚至坏死；依普利酮组及肾络通组小管扩张及上皮细胞水肿坏死与UUO组基本相同，但炎性细胞浸润明显减轻(见Fig．2．4)。Masson染色显示，假手术组有少量胶原纤维表达，可见于肾小球／肾小管基底膜及肾间质；UUO组结构紊乱，胶原成分显著增多，以肾间质为主；依普利酮组及肾络通组胶原纤维表达较假手术组增多，但与UUO组相比明显减少。(见Fig．2．5)。3肾间质炎性细胞计数与假手术组比较，UUO组大鼠炎性细胞浸润明显增多(氏0．01)。与UUO组相比，依普利酮组、肾络通组大鼠炎性细胞浸润减少有显著性差异(P<0．01，P<0．05)。与髓质区相比，皮质区炎性细胞浸润明显增多有显著性差异(pl<0．01，P<0．05)；与皮质区比较，皮髓交界区质区炎性细胞浸润减少，有显著性差异CP0．05)。Fas／FasL通路作为细胞凋亡信号转导途径的代表性通路，在肾间质纤维化形成中发挥重要作用。Fas和FasL表达的变异，可能与肾小管上皮细胞凋亡有关，第7d．14d肾小管上皮细胞凋亡增加，固有细胞丢失增多；第21天随着肾小管上皮细胞的不断丢失，FaS和FasL表达减弱，六味地黄汤可能通过减少FaS和FasL的表达，从而达到抑制肾小管上皮细胞的活化＼损伤或凋亡的作用，减轻肾间质纤维化的程度。34大黄蛰虫丸大黄蛰虫丸由大黄、黄芩、甘草、桃仁、杏仁、芍药、地黄、干漆、虻虫、水蛭、蛴螬、蛰虫等12味药组成，是东汉张仲景创立的活血化瘀代表方剂。方中用大黄、桃仁、虻虫、蛰虫、干漆、水蛭、蛴螬活血祛瘀；地黄和芍药养阴补虚；桃仁和杏仁滋阴润燥；黄芩清热祛湿；甘草益气和中，诸药制为丸剂，旨在峻药缓用，发挥活血祛瘀、缓中补虚的功效。葛美娜[57】的研究表明大黄蛰虫丸可以降低UUO大鼠Scr、BUN水平，起到肾功能保护作用，还可通过上调肾组织中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、Ang．I及Ang．II的表达，保护肾小管周围毛细血管内皮细胞和逆转损伤的血管生成，这可能是大黄蛰虫丸延缓肾小管间质纤维化的作用机制之一。3．5益气活血汤剂益气活血汤剂由黄芪、当归、苍术、紫花地丁、薏苡仁等药物组成，方中以黄芪、当归共为君药，益气补肾，活血通络；苍术健脾燥湿，．紫花地丁清热解毒，共为臣药，佐以薏苡仁健脾渗湿利尿，共凑益气活血，除涅解毒，健脾利水之功。石世华等[58】的研究采用输尿管悬吊术建立输尿管部分梗阻动物模型，并选用西药依那普利作为阳性对照，结果表明益气活血中药可能通过抑制TGF．p1、CTGF等致纤维化细胞团子的表达，减少‘ECM合成，延缓问质纤维化进展。从益气活血中药黄芪、当归的性味特点推断可能具有与依那普利相同改善肾小球毛细血管血供，改善肾缺血的作用。3．6真武汤真武汤是东汉张仲景创立的温阳化水的中医经典方剂，现代临床上主 综述要用于急慢性肾小球肾炎、肾病综合征、糖尿病肾病、慢性肾功能衰竭、等疾病【591。已有的研究表明真武汤可减少UUO大鼠的蛋白尿，延缓肾小管间质纤维化进展【601。韩凌[6l】的研究表明真武汤可以增加大鼠24h尿量，有效缓解蛋白尿、低蛋白血症、肾功能下降等症状。此外，真武汤还可以降uuo大鼠尿中肾损伤分子1(kidneyinjurymolecule．1，ⅪM．1)、clusterin和OPN含量，从而达到缓解肾功能下降的作用。宋业旭【6列的研究表明真武汤可能通过阻断NF．KB信号传导通路，下调TNF．a、MCP．1的表达来实现其延缓肾间质纤维化进程的作用。3．7通心络通心络胶囊由人参、水蛭、土鳖虫、蜈蚣、蝉蜕、赤芍、冰片等中药组成。现代药理学证实，人参可通过脂质抗氧化作用增强肾小管管腔的内皮反应性；水蛭可抗凝血、降血脂及升高血浆白蛋白；土鳖虫能抗血小板聚集、降低全血黏度；蜈蚣搜风解痉，蝉蜕息风止痉，赤芍活血散血、行瘀止痛，冰片芳香通窍，诸药合用有活血畅脉之效。田晓【63J的研究证实通心络可抑制UUO大鼠肾组织TGF．B1、a—SMA和ECM的表达，减少细胞的移动和炎症浸润，推测通心络胶囊可保护肾小管上皮细胞之间的黏附，减少上皮细胞的坏死，保证某些间充质细胞上皮细胞标志物的正常表达，从而减少上皮细胞的转化，延缓肾纤维化的病理进程。3．8抗纤灵方抗纤灵方由丹参、制大黄、桃仁、当归、牛膝五味中药组成，全方以活血为特征，兼以扶正泄浊、攻补兼施，使泻而不伤正，补而不滞邪。动物实验结果显示该方能明显抑制TNF．Q、血小板衍生生长因子(Platelet．derivedgrowthfactor，PDGF)、TGF．pl等促纤维化细胞因子的过度表达，从而减轻ECM在肾小球和肾问质的沉积，改善了肾脏纤维化t64J0刘煜敏[65]的研究表明抗纤灵方可下调TGF—p两型受体(T13RI和T陬III)的表达，还可抑制TGF'13．Smad通路信号分子Smad2的磷酸化及总蛋白表达，从而减少肾间质胶原蛋白沉积，改善肾间质纤维化。张悦[66】的研究表明抗纤灵方可增加肾纤维化保护性因子HGFmRNA的表达，而抑制肾组织MAP心豆路分子ERK1／2和p38蛋白磷酸化，改善肾功能，减少胶原含量，延缓肾间质纤维化的进展。张新志f67】的研究表明抗纤灵冲剂可降低UUO大鼠Scr、BUN及尿微量清蛋I兰t(MA)、尿p2．微球蛋E1(132-MG)、 综述尿NAG等指标，可能是通过舒张血管、调节管球反馈、改善肾小管间质纤维化及影响细胞因子、炎症介质的合成与分泌等多途径、多靶点地保护肾功能的。3．9血府逐瘀汤血府逐瘀汤是清．王清任理气活血代表方，主要由桃仁、红花、当归、川芎、大黄、赤芍、牛膝、柴胡、枳壳、桔梗、甘草等药物组成，具有行气活血、祛瘀止痛的功效。方中四逆散疏肝理气，气行则血行；桃红四物活血化瘀以养血，防纯化瘀以伤正；加引经药桔梗引诸药上行达于胸中；牛膝引血下行、通利血脉。此方能活血而不伤正、理气而不耗气。现代药理证实血府逐瘀汤具有改善微循环、抗凝血的作用。陆敏等【68】的研究表明，血府逐瘀胶囊可明显改善UUO大鼠肾功能，肾组织中磷酸化Smad2∈P—Smad2)和Smad2蛋白表达也明显减少(P<0．05)，说明血府逐瘀胶囊可通过抑制梗阻侧肾组织中Smad2蛋白的表达以及活化，抑制Smad通路信号传导，从而改善梗阻性肾病模型大鼠的肾功能和肾间质纤维化程度。3．10肾炎康复片，肾炎康复片具有益气养阴、健脾补肾、清解余毒的功效，主要用于气阴两虚、脾肾不足、水湿内停所致的水肿，症见神疲乏力，腰膝酸软，面目、四肢浮肿，头晕耳鸣，或慢性肾炎、蛋白尿、血尿见上述症候者。叶婷婷等[69】将肾炎康复片用于UUO大鼠，结果显示与模型组相比，治疗组肾组织间质纤维化面积显著减少(P<0．01)，纤维连接蛋白(FN)及基质金属蛋白酶抑制物．1(TIMP．1)表达减弱(P<0．01)，说明肾炎康复片可下调FN和TIMP．1在UUO大鼠肾间质中的表达，从而延缓肾间质纤维化的进展。3．11参附注射液参附注射液源于中医传统方剂”“参附汤雎，具有回阳救逆，益气固脱的功效，主要用于阳气暴脱的厥脱症(感染性、失血性、失液性休克等)的治疗，也可用于阳虚(气虚)所致的惊悸、怔忡、喘咳、胃疼、泄泻、痹症等证。其主要有效成分是人参皂苷和乌头类生物碱。陈文莉等[70l研究证实，经参附注射液治疗后UUO大鼠肾小管损害程度及肾问质纤维化定量分析显著低于模型组(氏0．05)，组织中HGF表达明显上调(氏0．05)，结果表 综述明参附注射液可使梗阻侧肾脏HGF的表达上调，进而减轻RIF，起到肾功能保护作用。3．12灯盏细辛注射液灯盏细辛注射液的有效成分主要为黄酮类物质，具有改善微循环、扩张血管、增加组织灌注及改善脂质代谢等作用。邓英辉等【71]的实验表明与UUO组相比，治疗组大鼠肾皮质胶原相对含量显著下降，a．SMA、TGF．61、ColI表达明显减少(P<0．01)，提示灯盏细辛注射液对大鼠肾间质纤维化具有显著的改善作用，这种作用可能是通过抑*0TGF．D1表达，减少ColI合成，阻止肾小管上皮细胞转分化实现的。3．13桃核承气汤桃核承气汤首载《伤寒论》，是治疗下焦蓄血证的代表方剂，活血祛瘀与泻热攻下并用。现代药理研究表明桃核承气汤具有降低血粘度，延长凝血时间，抑制纤溶剂，抑制血栓形成和血小板凝聚，降低血糖、血脂，抗惊厥，抗肾衰，解热等作用，主要用于急性盆腔炎、胎盘残留、附件炎、肠梗塞、急性坏死性肠炎等病的治疗。赵雪莹等【72]将本方应用于UUO大鼠，发现治疗组血清TNF．a和IL．6明显下降，认为桃核承气汤组及其拆方组均可发挥较好的抗肾间质纤维化作用，可能与抗炎和减少ECM等因素有关。桃仁与大黄作用较桂枝明显(P