kir6.2基因敲除对mptp急性神经毒性影响

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1、南京医科大学硕士学位论文Kir6.2基因敲除对MPTP急性神经毒性的影响姓名：常静申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：胡刚20080501南京医科大学硕士学位论文英文缩略词表南京医科大学硕士学位论文论文独创性声明本论文堑匹：2基固塾险盟丛￡!里．垒：丝盈丝盔!堕鲍量煎是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均在论文中作了明确的声明并表示了谢意。专业：j璋舅j牟缸盐作者签名：j荤L日期：二生业论文使用授权声明本人完全了解南京医科大学有关保留、使

2、用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：j啦导师签名：日期：南京医科大学硕士学位论文Kir6．2基因敲除对MPTP急性神经毒性的影响ATP敏感性钾通道(ATP．sensitivepotassiumchannel，K-ATP通道)是一类耦联细胞代谢和电活动、以细胞内的ATP／ADP水平为门控因素、非电压依赖性的特殊钾离子通道。脑内K-ATP通道的分子组成具有多样性，一般而言神经元的K．ATP通道主要是由飚r6．2亚基构成，Kir6．

3、1亚基in,4主要构成星形胶质细胞、小胶质细胞、成年神经干细胞和线粒体的K-ATP通道。K—ATP通道亚基组成的差异为研发高选择性治疗药物提供了重要的生物学基础。近年来，包括本实验室在内的研究表明，开放K．ATP通道可以通过抗兴奋性神经毒性、抗神经炎性反应、减少神经元凋亡等多个环节发挥神经保护作用。因此，K．ATP通道是针对中枢神经系统(centralnervoussystem，CNS)疾病的复杂病理机制实施多靶点保护性治疗、研发新型神经保护剂的理想靶标。随着对CNS疾病发病机制认识的不断深入，近年人们提出神经j损伤的治疗应从单纯的调节神经元功能的模式逐步转向以调节神经元．胶质

4、细胞、胶质细胞．胶质细胞相互作用的新模式。已有研究表明神经胶质细胞在多种神经系统疾病的发生发展过程中发挥重要的作用，尤其是星形胶质细胞介导的神经保护／神经损伤双重作用和小胶质细胞介导的神经炎性病理损伤作用更受学术界的高度关注。因此，靶向于胶质细胞功能的调节是治疗CNS疾病引人注目、富有前景的新策略，调节胶质细胞功能已经成为研发新一代神经保护剂的重要靶标。此外，研究显示多种神经退行性疾病及精神类疾病发病过程中均伴有成年神经再生的异常。作用于神经再生的调节因素，促进内源性神经再生，将成为神经系统疾病治疗中促进组织修复和功能重建的新策略。因此，寻找调节成年神经再生的新的内源性靶标、研

5、发有确切促神经再生作用的神经保护剂已成为治疗神经系统疾病的新方向。目前利用K．ATP通道敲除小鼠研究K．ATP通道与神经保护相关性的报道甚少。鉴于瞄r6．2是构成神经元K．ATP通道的主要亚基，2南京医科大学硕士学位论文本文工作应用Kir6．2基因敲除小鼠研究、阐明K-ATP通道在经典生物毒素MPTP(1-methyl．4-phenyl．1，2，3，6-tetraydropyridine，MPTP)急性神经毒性中的作用，旨在获得K-ATP通道发挥神经保护作用的直接证据，并进一步完善其神经保护作用的相关机制，为治疗CNS疾病提供新的思路，也将为研发理想的神经保护剂提供新的靶标。目

6、的：应用飚r6．2基因敲除小鼠研究、阐明K．ATP通道对MPTP急性神经毒性的调节及其作用机制。方法：1)预先给予WT以及Kir6．2KO小鼠Iptakalim(10mg。kg-'．day一，P．O．)、Diazoxide(10mg‘kg"1．day"1，P．O．)、Cromakalim(150或300gg·kg"l-day～，p．o．)灌胃；1h后皮下注射MPTP(20mg·kg一，singleinjection，S．C．)，同时腹腔注射丙磺舒(probenecid，250mg·kg～inDMSO，i．p．)。MPTP注射后连续给予Iptakalim、Diazoxide、Cr

7、omakalim灌胃3d；于实验第3d统计死亡率并应用自主行为和爬杆实验观察小鼠行为学改变；同时对部分动物进行5．溴脱氧尿核苷(5-bromodeoxyuridine，BrdU)标记(50mg·kg～，every2h×4，i．p．)，24h后灌注动物取脑；未进行BrdU标记的动物处死后留取纹状体脑区新鲜脑组织。2)应用免疫组织化学研究纹状体及黑质脑区DA能神经元损伤、星形胶质细胞活化情况，同时检测侧脑室室管膜下区(subventricularzone，SVZ)、海马颗粒细胞下区(subgra