庆大霉素可视化免疫快速检测方法的研究

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1、分类号：TS201，6密级：(秘密、机密、绝密)学校代码：10057研究生学号：09811512庆大霉素可视化免疫快速检测方法的研究StudyontheVisualImmunoassayforRapidDetectionofGentamicin专业名称：农产品加工及贮藏工程(农)指导教师：王俊平教授研究生姓名：徐小婧申请学位级别：农学硕士论文提交只期：2012年3月论文课题来源：自选课题学位授予单位：天津科技大学天津科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行

2、研究工作所取得的成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：镓_砸狻日期：加／2年≥月／r日知权和专利权保护声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下完成的，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学；所涉及的创

3、造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，以本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。．八作者签名：钚^)嘏日期：刎胆年今月／．r日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，同意公布论文的全部或部分内容，允许论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以

4、采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口(请在方框内打“√”)，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密澎(请在方框内打“√”)。作者签名：彳镓心吨套R期：加f≥年≥月心同剔磴轹物嗍：训≥年≥月帅7f摘要本论文对庆大霉素的可视化免疫快速检测方法进行了系统研究，分别采用免疫层析试纸条及免疫亲和柱的检测方法检测动物源性庆大霉素残留。采用20nm的胶体金标记庆大霉素多克隆抗体，戊二醛二步法偶联卵清蛋白制成庆大霉素包被抗原，采用柠檬酸三钠还原法制备粒径为20nm胶体金，经过一系列优

5、化，最终确定胶体金标记抗体最适pH为8．5，最佳抗体标记量为25烬。根据最优条件成功制得胶体金标记抗体。以硝酸纤维素膜为固相载体，以包被抗原和羊抗兔二抗分别作为检测线和控制线，金标记抗体喷涂在玻璃纤维素垫上，制得快速检测庆大霉素免疫层析试纸条。本实验优化建立的庆大霉素胶体金免疫层析方法操作简便、快速，10min内即可得到检测结果，检测限为25¨g，L；同时与同类兽药及其他族常用兽药均无交叉，有良好的特异性。选取牛奶、牛肉、猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鱼肉、鸡蛋作为检测样品。所有样品不需要有机溶剂前处

6、理，添加三个不同浓度的庆大霉素，经过简单的处理即可上样检测，并得到与标准溶液梯度检测近似的结果。方法在牛奶中检出限为100pg／L，牛肉、猪肉中检出限为501ag／kg，在其它样品中检出限为10099／kg，均低于最高残留限量。与酶联免疫分析方法的一致性较好。试纸条在4。C下密封干燥条件下至少可保存2个月。所研制的试纸条无需任何检测仪器，操作快速，准确，适用于动物源性食品中庆大霉素残留的现场大量筛选。本研究采用溴化氰活化的琼脂糖凝胶作为固相载体分别偶联了抗庆大霉素多克隆抗体及抗HRP多克隆抗体作

7、为检测层和对照层组装成的免疫亲和检测柱，所建立的方法检测限为10rtg／L，全部检测时间在10rain内完成，显色时间为4min。首次使用这种方法对牛奶、牛肉、猪肉、鸡肉4种动物源性食品的庆大霉素残留进行检测。所有样品用PBS直接稀释10倍进行提取，方法对所有检测样品的检出限100I．tg／L(1ag&g)。免疫亲和柱快速检测方法简便、快速，为新型的可视化快速检测技术提供了新的思路。关键词：庆大霉素；可视化；快速检测；免疫层析试纸条；免疫亲和柱ABSTRACTInthispaper．thevis

8、ualandrapidimmunoassaymethodsweredevelopedforthedetectionofGentamycin(GEN)．TheGENresiduesinsomeanimalderivedfoodweredetectedbyimmunochromatographicstripandimmunoaffinitytestcolumn，respectively．Colloidalgoldwaspreparedforlabelingthepolyclonalantibodyo