免疫磁珠快速检测金黄色葡萄球菌方法的研究

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1、中文摘要金黄色葡萄球菌是自然界广泛存在的一种病原微生物。近年来，金黄色葡萄球菌引起食物中毒事件频频爆发。因此，对金黄色葡萄球菌进行快速、准确检测非常重要。传统金黄色葡萄球菌检测方法基于微生物培养，虽然准确可靠，但操作耗力，检测周期长。现有快速检测方法，如PCR、各种快速检测试剂盒和生物传感器等，虽然检测时间有所缩短，但对样品纯度要求高，基本上都是通过增菌、平板分离来挑取目标菌进行检测。因此寻找一种快速分离目标菌并结合现有的快速检测技术的新方法显得十分有意义。免疫磁分离结合了免疫反应的特异性和磁分离的简便高效性。该技术能快速地从复杂样品分离出目标物。鉴此，本论文在前期研究基础上，建立了以免

2、疫磁珠为载体，结合聚合酶链反应(PCR)或ATP生物发光快速检测金黄色葡萄球菌的方法，该方法能用于实际样品检测。本论文主要内容如下：(1)综述了免疫磁珠的制备及应用，论述了ATP生物发光法和PCR技术发展和运用，简述了金黄色葡萄球菌的危害及现有检测方法。(2)将磁性纳米颗粒和抗体进行偶联，并采用了红外光谱和透射电镜等方法对其相关性能进行了表征。测试了免疫磁珠在不同条件下对金黄色葡萄球菌的捕获效率，其最佳捕获效率在65-80％之间，捕获效率相对稳定。T(3)将磁分离、免疫磁分离结合常规致病菌培养分离方法对实际样品进行了检测。(4)将免疫磁分离与ATP生物发光技术相结合检测金黄色葡萄球菌，该

3、方法能用于实际样品检测。(5)采用免疫磁分离与PCR和实时PCR(R卫PCR)技术相结合检测金黄色葡萄球菌。该方法简便快速，特异性强，具有一定的灵敏度。关键词：免疫磁分离，金黄色葡萄球菌，ATP生物发光，聚合酶链反应ABSTRACTStaphylococcusaureusiswidespreadinnatureasakindofpathogenicmicroorganisms．Inrecentyears，．foodpoisoningiscausedfrequentlybythisorganism．Rapidandaccurateidentification．of＆aureusisthus

4、veryimportanttofoodsafety．Traditionalculture-basedmethodsfordetectionofstaphylococcusaureusarequitelaborintensiveandtimeconsuming．Currentrapidmethods，‘suchaspolymerasechainreaction(PCR)，rapiddetectionkits，biosensors，etc．，somehowshortentheturnaroundtime，buttheyposeastrictrequirementonsamplepurity；

5、usually，bacteriaareisolatedandidentifiedafterculturing．Therefore，itisofgreatsignificancetostudyamethodthatcombinesrapidseparationoftargetbacteriawithoneofexistingrapiddetectiontechniques．Immuno—magneticseparation(IMS)combinesthespecificityofimmunoreactionswiththeconvenienceandhighefficiencyofmagn

6、eticseparation．Itcanrapidlyisolatethetargetanalytefromcomplicatedsamplematrices．Therefore，thispaperestablishedseveralmethodsfordetectionofs．aureusbasedonthecombinationofIMSwithK四bioluminescencetechniqueorPCR，andthemethodwereappliedtotestreal—worldsamples．Themaincontentsareasfollows：1．Thedevelopme

7、ntandapplicationsofIMS，ATPbioluminescence，andPCR，theharmofSaureus，andexistingdetectionmethodsarereviewedanddiscussed．m2．Antibodyconjugated—magneticparticlesarecharacterizedbyinfrared(IR)spectroscopyandtransmissionelect