核仁素适配体修饰的雷公藤甲素体外抗胰腺癌作用研究及机制初探

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1、国内图书分类号：阳占国际图书分类号：西南交通大学研究生学位论文核仁素适配体修饰的雷公藤甲素体外抗胰腺癌作用研究及机制初探年级三Q二二级姓名奎玉梅申请学位级别亟±专业虫药堂指导教师呈超墓二零一四年五月ClassifiedIndex：U．D．C：R76}IlIIIIttlLLIItlIIIIIIIll11111111111111fY2576752SouthwestJiaotongUniversityMasterDegreeThesisSTUDIESOFNUCLEOLⅢAPTAMER．MODIFIEDTRjPTOLIDE’SANTICA

2、NCEREFFECTONGEMCITABINE．RESISTANTHUMANPANCREATICCANCERANDITSMECHANISM肼脚DGrade：20llCandidate：CheYumeiAcademicDegreeAppliedfor：MasterSpeciality：ChinesepharmacySupervisor：Chao—YingMaⅣ睑Y．2014西南交通大学硕士学位论文主要工作(贡献)声明本人在学位论文中所做的主要工作或贡献如下：(1)通过CCK．8法检测雷公藤甲素．核仁素适配体偶合物(以下简称偶合物)、

3、核仁素适配体、雷公藤甲素对MIAPaCa．2的增殖抑制作用。实验结果表明：随着药物作用浓度升高，核仁素适配体对MIAPaCa-2表现出较强的增殖抑制作用；偶合物较雷公藤甲素相比活性降低。这意味着核仁素适配体对雷公藤甲素的结构修饰，影响了偶合物的细胞毒性。(2)本研究采用CCK-8法对比偶合物和吉西他滨对吉西他滨耐药的胰腺癌细胞系——MIAPaCa．2的增殖抑制作用，结果显示偶合物具有更优的体外抗胰腺癌活性。(3)采用AnnexinV／PI双染法、ELISA试剂盒检测Caspase．3活性的方法，检测偶合物对MIAPaCa．2细胞系

4、凋亡诱导作用，结果表明偶合物可通过Caspase依赖机制有效诱导MIAPaCa．2凋亡。(4)本研究采用免疫印迹法，检测偶合物对MIAPaCa-2中HSP70表达的影响。结果表明，偶合物降低了MIAPaCa．2中HSP70的表达水平，该结果与CCK．8以及凋亡检测结果相对应，推测偶合物可能通过影n向MIAPaCa-2中HSP70表达，从而调节凋亡相关机制，促进细胞凋亡。本研究检测了偶合物对胰腺癌细胞系MIAPaCa-2的增殖抑制作用，并初步探索了其抗肿瘤机制，为偶合物抗胰腺癌具体作用机制的研究奠定了基础。本人郑重声明：所呈交的学位

5、论文，是在导师指导下独立进行研究工作所得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明。本人完全了解违反上述声明所引起的一切法律责任将由本人承担。学位论文作者签名：枷桶日期：>汐f啦-S哆本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权西南交通大学可以将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复印手段

6、保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1．保密I"I，在年解密后适用本授权书；2．不保密√使用本授权书。(请在以上方框内打“√”)学位敝作者虢手毛私指制嗽：日期：训，p‘岁‘西日期：≯形，垆．史讨西南交通大学硕士研究生学位论文第1页摘要目的：研究雷公藤甲素．核仁素适配体偶合物(简称偶合物)体外抗胰腺癌作用，并对其机制进行初步探索。方法：(1)采用CCK．8法检测不同浓度、时间点(24，48h)核仁素适配体细胞毒性，以及对比偶合物、雷公藤甲素，对MIAPaCa-2细胞增殖的抑制作用。(2)以吉西他滨耐药的胰腺癌胞系——MIAPaCa-

7、2，作为细胞模型，采用CCK．8法对比不同浓度、不同时间点(24，48，72h)偶合物和吉西他滨对MIAPaCa-2细胞增殖的抑制作用，计算药物IC50。(3)采用AnnexinV／PI双染法、ELISA试剂盒检钡tJCaspase．3活性，检测偶合物对MIAPaCa．2细胞系凋亡诱导作用。(4)通过蛋白免疫印迹实验检测同时间点(12h，24h)，不同浓度偶合物对HSP70在MIAPaCa-2中表达的影响。结果：(1)偶合物、雷公藤甲素以及核仁素适配体均可有效抑制MIAPaCa-2增殖，抑制作用具有时间和剂量依赖性。200nM核仁

8、素适配体处理MIAPaCa-2细胞48h后，其抑制率达到38．19％。对在各个时间点，相同浓度下偶合物对MIAPaCa-2的抑制率均低于雷公藤甲素对MIAPaCa-2的抑制率，当药物作用浓度达到25nM，存在显著性差异，尸