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1、雷公藤甲素的含量检测分析[雷公藤甲素的含量检测分析] 雷公藤甲素的含量检测分析 海棠合剂由雷公藤、竹茹、佛手、莱菔子、赤芍五种药味加工而成，具有清热解毒、祛风除湿、杀虫止痒的功效，适用于银屑病、湿疹、红斑狼疮等疾病[1].雷公藤为方中的君药，系卫矛科植物雷公藤的根、叶和花，其主要含有二萜类、生物碱类及苷类、糖类等，雷公藤甲素的含量检测分析。其中主要活性成分之一是雷公藤甲素[2-3]（又名雷公藤酯醇）.其与雷公藤的主要药理活性相关，具有抗炎、抗肿瘤、免疫调节等作用[4-5],同时也是雷公藤引起毒副作用的主要成分[5-6],对心、肝、骨髓、胸、脾、肾
2、及生殖系统等都有一定的毒性[7].准确测定雷公藤甲素的含量对控制海棠合剂的质量具有重要意义，故选择雷公藤甲素的含量作为成药含量控制指标。 1材料与方法 1.1仪器 仪器：Agilent1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）,Agilent1200DAD二极管阵列检测器；AE-240电子天平，AEG220电子天平（日本岛津公司）;Millipore-QGradient超纯水装置（美国Millipore公司）. 1.2试药 雷公藤甲素标准品（由中国药品生物制品检验所提供，批号：111567-200502）;乙腈为色谱纯，水为Mil-lipor
3、e装置制备的超纯水；其他试剂均为分析纯。 1.3色谱条件 色谱柱：DiamonsilC18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）;流动相：乙腈-水，梯度洗脱（0~20分钟，20%A→50%A;20~21分钟，50%A→20%A）,流速：1.0mL/min;进样量10μl;紫外检测波长220nm;柱温35℃;理论板数按雷公藤甲素峰计算，应不低于10000. 1.4对照品溶液的制备精密称取雷公藤甲素对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.2mg对照品溶液。 1.5供试品溶液的制备 根据相关报道[8-10],本实验采用，精密量取海棠合剂50ml,加
4、中性氧化铝15g,水浴蒸干并混合均匀，用三氯甲烷作溶剂，湿法装入已有15g中性氧化铝层析柱中，再用三氯甲烷200ml洗脱，合并流出液及洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解转移并定容至5ml量瓶中，摇匀，滤过，即得。 1.6阴性样品溶液的制备 取缺雷公藤阴性样品约50ml,同法制成阴性样品溶液。 2结果 2.1系统适用性试验及专属性考察 分别将雷公藤甲素对照品溶液，供试品溶液及阴性样品溶液各10μl,注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。理论板数按雷公藤甲素峰计算，应不低于10000;缺雷公藤阴性样品溶液在雷公藤甲素峰相应位置上无吸收；R>1.5雷
5、公藤甲素峰与其他组分峰基线分离。见图1~3. 2.2方法学考察 2.2.1线性关系考察 精密称取雷公藤甲素对照品（111567-200502）0.00524g,置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为1号对照品溶液，精密吸取1ml分别置于10ml、100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为2、3号对照品溶液，分别精密吸取上述对照品溶液2号各1μl、2μl、4μl、6μl、8μl、10μl及3号1μl、5μl注入液相色谱仪，测定峰面积。结果表明，雷公藤甲素进样量在0.02096~0.2096μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归
6、方程和相关系数：A=1586.937C+2.495342,r=0.999951（C为雷公藤甲素进样量，单位μg,A为峰面积）. 2.2.2精密度试验 取同一份雷公藤甲素对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，结果RSD为1.32%2.3稳定性试验取同一批样品，在配制后0、4、8、16、24h进样10μl,按1.4项的色谱条件下测定雷公藤甲素峰面积，医学论文《雷公藤甲素的含量检测分析》(..)。以峰面积计算，RSD=0.59%.表明供试品在24h内稳定性良好。 2.2.4重复性试验 取同一批样品，精密量取50ml,共6份，精密称定，按1.4项的色
7、谱条件下进行分析，结果6份样品测得雷公藤甲素含量的平均值为0.15mg/500ml,RSD=1.40%,表明该HPLC法有良好的重现性。 2.2.5回收率试验 精密量取已知含量的同一批供试品（雷公藤甲素含量为0.16mg/500ml）50ml,共6份，分别精密加入雷公藤甲素对照品溶液（C=0.02096mg/ml）1.0ml,按1.3项下制备供试品溶液，在1.4项的色谱条件下记录峰面积，根据标准曲线求雷公藤甲素的含量，与加入量比较，计算回收率。平均回收率为93.5%,RSD=2.95%,符合定量分析要求，表明本实验方法具有较高的回收率，测定方法可
8、靠。见表1. 2.2.6样品含量测定 取样品4批次，依次对雷公藤甲素含量进行了测定，每批平行测定2次，结
