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1、一种免疫球蛋白g蛋白质由两个重链大约55kDa每两个轻链大约25kDa每个总分子量约160kDa目的:使用链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)腹腔注射诱发SD大鼠形成糖尿病模型;观察中药复方汤剂“益肾汤”对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护作用以及其对细胞周期调节蛋白p27表达的影响,同时以血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(Angiotensinreceptorblocker,ARB)“缬沙坦”作为对照,以探讨“益肾汤”防治糖尿病肾病(DiabeticNephropathy,DN)的作用机制。方法:成年雄性SD
2、大鼠41只,随机分成正常对照组(CON)及糖尿病建模组。糖尿病模型组大鼠禁食不禁水12小时后一次性腹腔注射2%STZ诱发糖尿病模型,正常组则注射相当剂量的柠檬酸缓冲液(0.1mol/l,PH4.3),72小时后测定血糖,如血糖16.7mmol/L,并稳定2-3天则算建模成功。建模成功的大鼠再随机分为糖尿病益肾汤治疗组(YS),糖尿病缬沙坦治疗组(ARB)和糖尿病未治疗组(DMN)。YS组给予相当于生药6.5g/公斤体重/天的浓缩药液灌胃;ARB组给予缬沙坦(商品名:代文),按20mg/公斤体重/天灌胃;
3、CON及DMN组则给予相应容量饮用水灌胃。实验开始3周大鼠每周测量体重,后5周每天测量体重,根据体重调整相应灌胃药量,持续治疗8周;实验结束前一天所有大鼠均禁食不禁水12小时,测量每只大鼠空腹体重,收集24小时尿液,记录尿量,测定24小时尿总蛋白、24小时尿白蛋白;以10%水合氯醛麻醉处死大鼠,心脏采血测定血糖、肌酐、尿素氮等指标。取左肾,生理盐水清洗擦干后称重,取右肾纵行切开一半放入10%中性福尔马林液固定,石蜡包埋,制作切片进行免疫组化检测p27的表达,并利用图像分析系统进行定量分析。结果:所有糖尿
4、病造模组大鼠均被诱发糖尿病。体重:实验开始时,各组无显著性差异;实验结束时DM各组均显著小于CON组(P0.05),各DM组间差异无统计学意义。肾脏相对重量:DM各组均显著大于CON组(P0.05),各DM组间差异无统计学意义。血糖:DM各组均显著高于CON组(P0.05),各DM组间差异无统计学意义。血肌酐:各组间差异无统计学意义。血尿素氮:所有DM组均显著高于CON组(P0.05),DM组间差异无统计学意义。24h尿量:所有糖尿病组均显著高于CON组(P0.05),DM组间差异无统计学意义。24h尿
5、总蛋白含量:CON组显著小于各DM组(P0.05),DM组间差异无统计学意义。24h尿白蛋白含量:所有DM组均显著高于CON组(P0.05),DMN组显著高于ARB组和YS组(P0.05),ARB组与YS组间差异无统计学意义。p27表达:各DM组均显著高于CON组(P0.05);DMN组显著高于ARB与YS组(P0.05);ARB与YS组差异无统计学意义。相关性分析:p27的表达与24h尿白蛋白呈显著正相关(γ=0.842,P0.05)、与24h尿总蛋白相关性无统计学意义(γ=0.162,P0.05)。
6、结论:1、益肾汤可减少糖尿病大鼠尿白蛋白排出、抑制肾脏p27表达;益肾汤防治糖尿病肾病作用与降低肾脏p27的表达有关。2、益肾汤减少糖尿病大鼠尿白蛋白含量、抑制肾脏p27表达的作用与缬沙坦相仿2、糖化血红蛋白的英文代号为HbA1c。糖化血红蛋白测试通常可以反映患者近8~12周的血糖控制情况检测方法1、阳离子交换色谱法原理:糖化导致血红蛋白分子表面阳离子丢失。在弱的阳离子交换剂中,例如Biorex70,伴有增加的离子浓度和(或)pH下降,糖化血红蛋白在非糖化血红蛋白前先洗脱。这现象产生了糖化血红蛋白最初的
7、术语“快速血红蛋白”。阳离子交换色谱法可用于小型、微型或大型柱层析方法或部分或全自动的PHLC/FPLC方法。因为,其他翻译后修饰血红蛋白,例如醛亚胺型、甲酰化、乙酰化、乙醛加合物、降解物、老化人工物品和异常血红蛋白电荷交换也不同于正常的HbA0,所以已经列出了许多阳离子交换层析法的干扰因素。使用常规HPLC的方法。分离糖化血红蛋白亚组分是能达到满足需求的临床精密度。然而,已知HbA1c的峰不是均一的而是包含一重要的非糖化血红蛋白部分。少数糖化血红蛋白也整合到HbA0主峰中。通过使用特殊的柱原料(pol
8、y-CATA)和30~40min分离时间可以改善分离效果。这些方法可以作为参考步骤但不适合常规使用。所有的阳离子交换色谱法对pH和温度的变化敏感,因此要控制pH和温度。说明:根据红细胞代谢动力学推测初始HbA1c值大约每日破坏1/120(≈0.83%)。因为糖化在合适的治疗下甚至健康人也产生,故这个理论值在体外不能达到。控制不理想的糖尿病患者通过加强治疗而达到血糖量正常,可以发现HbA1c值最大下降率以大约每10d下降正常血糖的1%(绝对的