齐墩果酸衍生物介导的白血病细胞k562的细胞凋亡及与akt信号通路的关系

《齐墩果酸衍生物介导的白血病细胞k562的细胞凋亡及与akt信号通路的关系》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、曲弘理乒土学硕士学位论文Master'sThesis齐墩果酸衍生物介导的白血病细胞K562的细胞凋亡及与Akt信号通路的关系作者姓名：澄娃花．：指导教师：迕佳蓬煎援学科专业：生塑圭匕堂皇生t壬生堑堂所在学院：生金鍪瞠堂睦提交日期：三雯二四玺三层中国杭州ZHEJIANGSCI．TECHUNIVERSITYMASTERDISSERTATl0NOleanolicacidderivativesmediatedtheapoptosisinK562leukemiacellsandtherelationshipwiththeAktsign

2、alingpathwaysShuhuaPanDirected缈ProfessorChuanlianXuCollegeofLifeSciences，ZhejiangSci—TechUniversityHANGZHOU，CHINA分类号：UDCl密级：齐墩果酸衍生物介导的白血病细胞K562的细胞凋亡及与Akt信号通路的关系论文答辩日期‘2014．3．6答辩委员会主席刘新垣论文评阅人答辩委员会成员俞永平、于威、徐涛阎辉、吴炯、于威、蒋彩英浙江理工大学学位论文原创性声明奉人郑煎声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学赎。断皂交的学位论文，是

3、率人在譬师}岛舞对i、．独立避行研究』作所取搿娲城粜；际文审已}]。J7氘_主嗡鞠j疆j∞Iqj：÷扑，l二i0j．1i包禽任傅其蚀个人或集体已经冀乏裘或撰写避的{乍晶及成果的内绔。论文为本人柬自撰丐．我对所写的内容负赛．井完垒舞识到率声”j接0法槔结麓由盘／i，五强学‘缱论之嚣喾签薹日期：砷卉年与蜮一．粹6浙江理工大学学位论文版权使庵授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使剐学位论文的授定，同惑学棱保蜀尊向匿家包共捧¨或嚣L粕送交论文的复印件釉电子敝，允许论文故查阍或谌陵，率久授权街i工理一一又学可以坼厶学位论文韵全部或

4、部分内容编入有关数据瘁进行检索．可以果用影印、，到1：文翻掺等复剃予段缘存郓江编本学位沧文：{、曩企窆绺贵签豢保密I¨j．在一——一一革孵鬻百馒耀奉糕板。}={ji保鬻～，蒲埠衣n燃：)口∥#弓奠白H指导毂聪氍☆I之世}j蠲：沙1妒年辛鹭课题来源浙江省自然科学基金【NSF(Y4110320)，NSFCtNos．20972086，21172130)】．浙江理工大学硕士学位论文齐墩果酸衍生物介导的白血病细胞K562的细胞凋亡及与Akt信号通路的关系摘要随着恶性肿瘤的发病率和死亡率的不断增加，抗肿瘤药物的研发成为当今生物医学界面临

5、的重大课题。由于天然抗肿瘤药物具有高效、低毒等优点，所以从天然产物中筛选出有效的抗肿瘤药物是药物研发的重要手段。五环三萜类化合物在抗肿瘤药物的发展中起到不可忽视的作用。齐墩果酸(Oleanolicacid。OA)是天然的五环三萜类化合物之一，已经用作抗细菌、抗真菌、抗肿瘤、抗炎制剂等。最近，许多齐墩果酸衍生物主要是针对齐墩果酸c3、13位双键、A环和C28等官能团的结构修饰，以提高齐墩果酸衍生物的抗肿瘤活性和降低其对正常细胞的毒害作用。本研究对己合成的2．氨基嘧啶齐墩果酸(化合物4)和1，2．嗯唑齐墩果酸(化合物5)的抗肿瘤

6、作用机制研究如下：1)利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测化合物4、5对K562细胞的细胞毒性作用。化合物4采用10州、20州、40gM、60州、80州、100州，化合物5采用20rtM、40gM、60州、80gM、100rtM、120州6个浓度，以紫杉醇为阳性对照。K562细胞在不同浓度化合物下孵育72h后检测在490rim吸收值。结果显示化合物4、5显著抑带1]K562细胞的增殖，并呈浓度依赖的方式，IC50值分别为32．686gM_平139．252gM。2)检测化合物对K562细胞形态学的影响。化合物4、5(20州、

7、40州)处理K562细胞24h后，用Hoechst33342工作液染色30rain，于荧光显微镜下看肿瘤细胞形态。结果显示化合物处理后，出现凋亡小体、核固缩、核裂解等细胞凋亡的典型特征。由此初步推测目的化合物通过凋亡途径抑制了K562细胞的增殖。3)采用流式细胞术检测化合物对K562细胞周期的影响。化合物4、5。(40gM)处理细胞24h后，细胞用PI(50gg／mL)避光染色30min。流式细胞术检测结果显示化合物4、5处理细胞后，G1期细胞从29．89％(对照)分别增加41．65％jfl42．15％，初步推断化合物抑制细

8、胞增殖与细胞周期阻滞在G1期有关。4)利用Westernblot的方法检测化合物对Bcl．2、BaX和聚ADP核糖聚合酶(PARP蛋白)、pAktl表达的影响。化合物4、5以201aM、40州、60州的浓度处Y-里K562细胞36h后，下调抗凋亡蛋I兰tBcl．2的表达，上调促凋亡蛋ElB