抗凋亡蛋白bcl-2在岗田酸诱导的神经细胞退化中的作用研究

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1、Y79550tt8後旦大学博士学位论文学校代码；10246学号：991003抗凋亡蛋白Bel-2在岗田酸诱导的神经细胞退化中的作用研究^t院系：上海医学院神经生物学系专业：神经生物学姓名：陈丽琴指导教师：孙凤艳教授完成日期：2003年5月2日●■缩略词表ABCavidin—biotinperoxidasecomplexADAlzheimer’sdiseaseAIFApoptosisinducedfactorALSamyotrophiclateralsclerosisApaf-1Apoptosisassociatedfactor-1BHBcl·2homologu

2、eBSAbovinesel'unlalbumincaspasescysteineaspartate-specificpmteinasesCaMKIICalcium／calmodulin-dependentproteinkinase1Iodecelldivisioncyclekinasecdkeyclin-dependentkinaseCNScentralnervoussystemCytCcytochromeCDAB3，3'-diaminobenzidineFITCfluoresceinisothiocyanateGFPgreenfiuorescentprote

3、inGSKglycogensynthetasekinaseMAPmicrotubule-associatedproteinMAPKmitogenactivatedproteinkinaseNFTsNeurofibrillarytanglesOAokadaicacidPBSphosphatebuffersalinePDParkinson’sdiseasePHFspairedhelicalfilamentsPPproteinphosphataseSPsenileplaqueSTSstaurospofineTUNELterminaldeoxynucleotidyl·

4、transferase(TdT)-mediateddUTPnick-endlabeling卵白素生物素过氧化物酶复合物阿尔茨海默病凋亡诱导因子肌萎缩性侧索硬化症凋亡相关因子一1Bcl．2同源结构域小牛血清白蛋白半胱氨酸．天门冬氨酸特异性蛋白酶钙／钙调素．依赖性蛋白激酶Ⅱ细胞分裂周期依赖蛋白激酶周期蛋白依赖蛋白激酶中枢神经系统细胞色素C3，3’．二氨基联苯胺异硫氰酸荧光黄绿色荧光蛋白糖原合成酶激酶微管相关蛋白丝裂原激活的蛋自激酶神经纤维缠结岗田酸(冈田酸)磷酸盐缓冲液帕金森病双股螺旋细丝蛋白磷酸酶老年斑星形孢菌素末端转移酶介导的核苷酸缺口末端标记中文摘要曩抗凋亡

5、蛋白Bel一2在岗田酸诱导的神经细胞退化中的作用研究●凋亡机制参与了AD中神经细胞退化过程。Bcl-2家族在凋亡信号转导通路中起重要调节作用。Bcl．2家族包括促凋亡和抑凋亡两类作用相反的蛋白，Bcl．2是起抑凋亡作用的代表性成员，其抗凋亡作用与家族中促凋亡蛋白Bax密切联系，Bcl一2与Bax之间的比例对细胞是否发生凋亡起重要作用。岗田酸(0A)是蛋白磷酸酶抑制剂，在整体或离体条件OA能使神经细胞微管相关蛋白tau异常高度磷酸化而使神经细胞退化，部分模拟了AD样病理特征。离体时OA所致神经细胞退化为凋亡，而整体时也发现OA能引起神经细胞发生凋亡样DNA双链断

6、裂。为了研究Bcl．2相关凋亡调节机制在OA所致神经细胞退化中的影响，本课题首先采用大鼠脑额叶皮质定位注射OA的整体模型，观察OA致神经细胞退化时Bcl．2和Bax的表达变化规律，探讨Bcl．2在OA致神经细胞退化时的作用特征以及Bcl．2是否参与此过程中细胞自身代偿性保护机制；继而采用OA诱导体外培养神经细胞凋亡性退化的离体模型，研究Bcl一2过表达是否抑制OA所致神经细胞退化，以进一步确定Bcl．2在OA诱导的神经细胞退化过程中是否具有细胞保护作用。整体实验部分Bcl．2在OA诱导大鼠脑神经细胞退化中的作用分析为探讨Bcl．2相关凋亡调节机制与整体时OA致

7、神经细胞tau蛋白高度磷酸化和退化之间的关系，采用大鼠额叶皮质定位注射OA的模型，应用免疫组织化学、免疫荧光三标结合激光共聚焦扫描的方法，检测OA致神经细胞退化时对Bcl．2表达和Bax表达的影响及二者与tau蛋白磷酸化的共存关系。结果如下：1．在OA作用皮质，神经细胞高表达Bcl．2蛋白，OA作用皮质表达Bcl一2的细胞数明显增加，且具有时间和剂量反应特征，对各时间反应组的细胞计数显示，注射20ngOA12h、1d、3d时Bcl．2免疫阳性细胞的数目显著高于相应时间点的生理盐水对照组(序O．001)，且OA12h、1d、3d组与OA3h、6h、7d组相比有显

8、著性差异(12h，p