肝癌长链非编码rna差异表达谱构建及afap1-as1功能初步验证

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1、万方数据中图分类号UDCR735．7610硕士学位论文学校代码!Q主三兰密级公五肝癌长链非编码RNA差异表达谱构建及AFAPl．ASl功能初步验证Constructionofdifferentiallyexpressed10ngnoncoding一一1一RNAsprofilingandpreliminaryfunctionalverificationofAFAP1．AS1in1ivercancer作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：赵艳华临床医学临床检验诊断学医学检验系张文玲副教授答辩委员会

2、主席中南大学2014年5月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：衅吼盟年上月翠日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论

3、文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：辎日期：吐年上月生日导师签名：左阂灰纨、导师签名：蕴迓』丞丛日期：z翌型丝年—￡月墨王日万方数据肝癌长链非编码RNA差异表达谱构建及AFAP1．AS1功能初步验证摘要目的：探讨长链非编码RNA(10ngnon—codingRNA，lncRNA)在肝癌中表达情况

4、，构建肝癌差异表达lncRNA表达谱，筛选和鉴定与肝癌发生和发展密切相关的lncRNA，并分析差异表达lncRNA作为肝癌早期诊断、侵袭转移及预后复发相关分子标志物的可行性，为肝癌临床诊断及治疗提供新的策略。方法：在NCBIGEODateSets数据库中筛选肝癌组织基因芯片的原始实验数据，利用基因芯片显著性分析(，significanceanalysisofmicroarray，SAM)软件分析基因在肝癌中的表达情况，构建肝癌差异表达lncRNA表达谱。通过DAVID在线软件对差异表达lncRNA进行功能分析，

5、评估差异表达lncRNA在肝癌中的功能。然后选择差异显著的肌动蛋白丝相关蛋白1一反义RNAl(actinfilament．associatedprotein1-antisenseRNA1，AFAPl．ASl)进行初步功能验证。首先利用实时荧光定量PCR方法检测30对新鲜肝癌组织及对应癌旁组织中AFAPl．ASl的表达情况，验证SAM分析的结果。再利用组织微阵列切片结合原位杂交方法筛查82例肿瘤组织(包括食管癌11例、胃癌11例、肝癌26例和结直肠癌34例)及对应癌旁组织中AFAPl一ASl的表达情况，对表达差异

6、明显的肝癌组织，再扩大样本量(70对肝癌组织石蜡切片)进一步验证，并分析AFAPl一ASl表达与肝癌主要临床病理特征的相关性，评估其在肝癌淋巴结转移中的作用。结果：SAM软件分析肝癌组织基因芯片表达数据，得到显著差异表达lncRNA46个，其中表达上调lncRNA19个，表达下调lncRNA27个。DAVID在线软件功能分析发现RPL23AP64、TPTl一ASl、C3P1、AFAPl．ASl、WDFY3一AS2、FAM99B、TTTY6在肝癌中有重要功能。初步功能验证发现，AFAPl一ASl在30例肝癌新鲜组

7、织中表达水平显著低于癌旁组织(尸O．05)。扩大肝癌组织样本量后，仍然发现肝癌组织中的AFAPl一ASl表达水平明显降低，并且与临床分期和淋巴结转移有关(P

8、1．23％、28．21％、65．62％、68．75％和65．OO％。结论：本实验成功构建肝癌lncRNA差异表达谱，其中包括表达上调lncRNA19个，表达下调lncRNA27个；AFAPl．ASl在肝癌中低表达，与肝癌临床进展和淋巴结转移密切相关；AFAPl一ASl可作为新的肝癌候选分子标志物。图8幅，表10个，参考文献55篇。关键词：长链非编码RNA；肝癌；消化系统肿瘤；肌动蛋白丝