长链非编码rna-htsg在肝癌中的表达和功能研究

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1、M例SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目强健坤研究生姓名郭亚军指导教师姓名免疫学专业名称肿瘤免疫机制研究方向2015年4月论文提交日期苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：玆键讨B期：純：苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学

2、关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年__月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：日期：^1长链非编码RNA-HTSG在肝癌中的表达和功能研究中文摘要中文摘要目的

3、：长链非编码RNA参与调控多种生物学功能，其异常表达可导致多种疾病包括肿瘤。通过高通量基因芯片技术筛选肝癌中差异表达的lncRNA，探究其在肝癌的发生发展中的作用。方法：对16例肝癌及其癌旁组织进行高通量lncRNA芯片，生物信息学分析筛选差异表达的lncRNA，选择肝癌组织中显著下调的lncRNA，命名为lnc-HTSG。结合数据库分析其基因组信息和结构功能信息，RT-PCR验证lnc-HTSG在肝癌中的差异表达。RACE实验确定lnc-HTSG两端序列，OverlapPCR扩增lnc-HTSG全长序列；构建重组pLVX-Aclnc-HTSG慢病毒质粒，包装慢

4、病毒并感染肝癌细胞，RT-PCR检测lnc-HTSG过表达；设计引物检测lnc-HTSG3'末端和5'末端转录终止情况以及3'末端加尾操作确保lnc-HTSG的转录完整性；通过靶向lnc-HTSG的siRNA，下调HCC-LM3内源性lnc-HTSG，重组病毒感染SMMU-7721细胞上调lnc-HTSG，细胞划痕修复实验、Transwell迁移和侵袭实验检测lnc-HTSG对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果：通过lncRNA芯片及信息学分析筛选在肝癌组织中表达显著下调的lnc-HTSG。数据库分析其具有转录表达特征，部分序列在进化上高保守，RT-PCR结果和

5、表达谱芯片结果一致。RACE确定lnc-HTSG两端序列，克隆全长并构建慢病毒过表达系统，加尾实验证实lnc-HTSG转录完整性。体外细胞功能学实验表明，与对照组相比，下调lnc-HTSG的表达促进了HCC-LM3细胞的迁移和侵袭，而过表达lnc-HTSG抑制了SMMU-7721细胞的迁移。结论：长链非编码RNA-HTSG在肝癌组织中显著下调，其缺失可促进肝癌细胞的迁移和侵袭，是重要的肝癌抑癌基因。关键词：lncRNA；肝癌；RACE；迁移作者：强健坤指导老师：郭亚军I英文摘要长链非编码RNA-HTSG在肝癌中的表达和功能研究TheExpressionandFu

6、nctionofLongNoncodingRNA-HTSGinHepatocellularCarcinomaAbstractObjective：Longnon-codingRNAs(lncRNAs)regulateavarietyofkeybiologicalprocessesindevelopmentanddisease.DysregulationoflncRNAsislinkedtovarioushumandiseases,includingcancer.UsinglncRNAexpressionprofiling,wetrytofinddifferenti

7、allyexpressedlncRNAsaswellasitsfunctionalroleinhepatocellularcarcinoma.Methods：High-throughputlncRNAmicroarraywasperformedin16pairedHCCandadjacentnon-cancertissues.Lnc-HTSG,anovellncRNA,wasidentifiedtobesignificantlydownregulatedinHCC.UsingUCSCgenomebrowserandENCODEdatabase,weanalyse

8、dtheintegrat