脑出血后长链非编码RNA差异性表达及机制分析

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1、分类号:R743.3单位代码：10159密级：公开学号：201520450硕士学位论文（临床医学硕士专业学位）中文题目：脑出血后长链非编码RNA差异性表达及机制分析英文题目：DifferentialexpressionandmechanismanalysisoflongnoncodingRNAafterintracerebralhemorrhage论文作者：李进伟指导教师：滕伟禹教授学科专业：神经病学完成时间：2018年2月中国医科大学硕士学位论文脑出血后长链非编码RNA差异性表达及机制分析Differentialexp

2、ressionandmechanismanalysisoflongnoncodingRNAafterintracerebralhemorrhage论文作者李进伟指导教师滕伟禹教授申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科神经病学研究方向神经病学论文起止时间2016年3月—2018年2月论文完成时间2018年2月中国医科大学（辽宁）2018年2月中国医科大学硕士学位论文摘要目的：脑出血是一类死亡率高、致残率高的疾病，目前临床上对于脑出血患者有效的治疗方案非常有限。脑出血后继发性脑损伤机制，及神经再生、修复

3、机制是长期以来的研究热点。既往研究证实一些非编码RNA可以通过调控基因的转录、翻译及翻译后修饰等作用参与炎症反应，促进机体的损伤、修复、细胞再生等过程。在疾病的发生发展过程中，这些非编码RNA在体内有显著的差异性表达。既往针对于微小RNA在脑出血的发生发展过程中的研究较多，而长链非编码RNA的研究非常少，本研究将通过动物实验，分析脑出血后长链非编码RNA在脑组织中的差异性表达，并预测其生物学功能及作用机制分析。研究方法：本实验采用成年雄性C57BL/6小鼠，10-12周龄，24-28g，由北京维通利华实验动物技术有限公司

4、提供。该研究通过中国医科大学实验动物福利与伦理审查。将小鼠随机分为脑出血组（CH组），假手术组（C组）。根据立体定位技术建立小鼠脑出血模型，脑出血组将小鼠自体股动脉血15ul注入脑右侧基底节区，假手术组除不注射自体血外，其余步骤同脑出血组小鼠。成功造模小鼠使用FocalDeficits量表评分。造模24小时后取脑出血小鼠出血及周围脑组织100mg，假手术组小鼠相同部位脑组织100mg提取RNA。使用Arraystar小鼠LncRNAV3.0芯片对脑组织lncRNA及mRNA进行筛查。使用AgilentGeneSpring

5、GXv12.1软件挑选差异性表达的lncRNA及mRNA。通过GO，KEGG及Panther等数据库进行生物学及细胞通路分析，随机选择lncRNA进行qRT-PCR验证其表达的相对含量。通过TargetScan,miRanda等数据库进行lncRNA-miRNA-mRNA的内源竞争RNA机制分析，预测其在脑出血的发生过程中的生物学作用。数据统计学分析使用SPSSStatistics21及GraphPadPrism7等软件，计量资料比较使用t检验，计数资料比较使用χ2检验，P＜0.05有统计学意义。结果：1、实验小鼠造模成

6、功，均出现左侧肢体偏瘫症状。2、芯片分析结果，与正常脑组织相比，脑出血小鼠脑组织中有125个lncRNA有显著差异性表达（FoldChange≥2，P＜0.05），其中74个上调，51个下调；mRNA有247个显著的差异性表达（FoldChange≥2，P＜0.05），222个上调，25个下调。3、对于上调的lncRNA进行GO分析结果提示与这些lncRNA最相关的3个生物学过程分别为：免疫反应、免疫系统的过程、防御反应；最相关的3个细胞组分为：胞外区、细胞外间隙、细I中国医科大学硕士学位论文胞外区域部分；最相关的3个分

7、子功能为：内肽酶抑制剂活性、蛋白结合、内肽酶调节剂活性。4、细胞通路分析结果显示差异性表达的lncRNA和mRNA通过吞噬及细胞间粘附因子等相关通路发挥生物学功能。5、验证其中的一条lncRNA（uc011xxu.1），其相对表达量为2.17（P＜0.05），在脑出血脑组织中呈上调趋势。6、对uc011xxu.1分析结果提示共有20个编码蛋白的mRNA可能通过84个miRNA与uc011xxu.1形成lncRNA-miRNA-mRNA作用机制。7、uc011xxu.1调控的Usb1基因所编码的蛋白质，可能作用在细胞核内，

8、影响核糖核酸内切酶活性，参与细胞的修复过程、RNA代谢及含氮化合物代谢过程。结论：小鼠脑出血后，脑组织中的lncRNA有差异性表达。这些lncRNA在损伤脑组织中的作用机制复杂，有可能成为一个新的治疗靶点及生物学标记物应用于临床脑出血患者。关键词：脑出血；基因芯片；长链非编码RNA；uc011xxu.1；继发性脑损伤