钙激活中性蛋白酶作为抑制肝癌细胞转移靶点的效用研究

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1、贵阳医学院2014届硕士研究生学位论文《中国图书资料分类法》单位代码：10660分类号：R966学号：S110060贵阳医学院2014届硕士研究生学位论文钙激活中性蛋白酶作为抑制肝癌细胞转移靶点的效用研究研究生：王宁导师：沈祥春潘娅年级：2011级专业：药理学2014年5月26日-1-万方数据贵阳医学院2014届硕士研究生学位论文目录摘要.................................................1前言.................................

2、................3材料与方法...............................................5结果................................................14讨论................................................41结论................................................45参考文献.........................

3、.......................46英文摘要................................................50致谢................................................52缩略词表................................................53论文原创性声明..........................................54附：综述...............

4、................................55-2-万方数据贵阳医学院2014届硕士研究生学位论文钙激活中性蛋白酶作为抑制肝癌细胞转移靶点的效用研究专业：药理学研究生：王宁导师：潘娅教授沈祥春教授摘要：目的观察Calpain的相关抑制剂对不同转移能力肝癌细胞迁移浸润能力和肝癌细胞信号通路相关蛋白表达及活性的影响，进一步认识肝癌转移分子机制，为临床防治肝癌的转移复发提供依据。方法（1）用Westernblot检测3株不同转移能力肝癌细胞（MHCC97-H、MHCC97-L、HepG2）

5、和1株正常肝细胞（HL-7702）中Calpain-1及Calpain-2表达，筛选与肝癌转移有关的Calpain的亚家族成员；（2）用ALLM、CalpaininhibitorIV、CalpaininhibitorVI、Calpastatin四种Calpain抑制剂，分别给予高、中、低三种浓度预处理MHCC97-H肝癌细胞24h、48h及72h，用Westernblot方法观察Calpain-2的表达及剪切活性，选择4种抑制剂的最适浓度和作用时间；(3)用4种抑制剂的最适浓度和作用时间处理肝癌细胞和正常

6、肝细胞，观察4种抑制剂对肝癌细胞信号通路相关蛋白Src、FAK、及Dicer的表达，通过划痕实验检测对细胞迁移能力的影响，Transwell实验检测对细胞侵袭能力的影响。结果(1)与正常肝细胞HL-7702相比，Calpain-1在4种肝细胞中表达无统计学差异（P>0.05），Calpain-2在3种肝癌细胞中表达上调（P<0.05）,有转移能力的肝癌细胞中Calpain-2的表达上调（P<0.01）。(2)4种高浓度Calpain-2抑制剂（ALLM、CalpaininhibitorIV、Calpain

7、inhibitorVI、Calpastatin）分别处理MHCC97-H细胞72h，都使Calpain-2的表达下调（P<0.05或P<0.01）。(3)高浓度ALLM和CalpaininhibitorVI处理3种肝癌细胞和1种正常肝细胞72h后，与正常肝细胞相比，具有转移能力肝癌细胞MHCC97-H和MHCC97-L中SRC、FAK表达上调（P<0.01），Dicer的表达下调（P<0.01）；无转移能力的肝癌细胞HepG2中SRC、FAK表达增高不明显，（P>0.05），Dicer的表达下调（P<0.

8、05）。高浓度CalpaininhibitorIV和Calpastatin处理3种肝癌细胞和1种正常肝细胞72h后，与未加抑制剂组相比，具有转移能力肝癌细胞的SRC、FAK的表达下调（P<0.01），无转移能力的肝癌细胞HepG2中SRC、FAK表达下调不明显（P>0.05），Dicer的表达上调（P<0.01）。(4)划痕实验结果显示，高浓度ALLM和CalpaininhibitorVI处理3种肝癌细胞和1种正常肝细胞72h