成软骨相关mir-4287调控人软骨细胞聚蛋白多糖酶-1表达的研究

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1、成软骨相关miR-4287调控人软骨细胞聚蛋白多糖酶T表达的研究孙红张志奇黄志宇毛谷平余宝禧张程云傅明中山大学附属第一医院关节外科贵州医科大学附属医院骨科摘要：目的探讨成软骨相关miR-4287对人软骨细胞聚蛋白多糖酶-1(adisintegrinandmetalloproteinasewiththrombospondinmotif4,ADAMTS4)调控作用及其机制。方法取自愿捐赠的膝关节正常及骨关节炎软骨组织，采用实时荧光定量PCR检测miR-4287和ADAMTS4mRNA表达量;然后分离培养软骨细胞，取第1代骨关节炎细胞，

2、给予IL-1P处理，观察其对软骨细胞miR-4287和ADAMTS4mRNA表达的影响；分别给予MAPK信号通路抑制剂SP600125以及NF-kB信号通路抑制剂SN50预处理后联合IL-1B刺激，观察IL-1B介导的信号通路对软骨细胞miR-4287和ADAMTS4mRNA表达的影响；分别转染miR-4287模拟物及其阴性对照、miR-4287抑制物及其阴性对照，观察miR-4287调控软骨细胞ADAMTS4niRNA及蛋口的表达。荧光素酶报告实验验证miR-4287与ADAMTS4mRNA3'非翻译区(untranslated

3、region,UTR)的直接结合效应。结果与正常软骨组织比较，骨关节炎软骨组织miR-4287相对表达量下降，ADAMTS4mRNA相对表达量上升，比较差异有统计学意义(P<0.05)<>TL-1P下调软骨细胞miR-4287表达、上调ADAMTS4mRXA表达，与未经IL-1P处理的软骨细胞相比差异均有统计学意义(P<0.05)。经IL-IB介导的信号通路抑制剂预处理后，软骨细胞miR-4287相对表达量上升，ADAMTS4mRNA相对表达量降低，与未经信号通路抑制剂预处理细胞相比，差异均有统计学意义(P<0.05)o转染miR

4、-4287模拟物后，软骨细胞内ADAMTS4mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05);而转染miR-4287抑制物后,软骨细胞内ADAMTS4mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05)。无论结合位点为野生型或突变型，过表达miR-4287均不能改变报告载体的荧光素酶活性(P>0.05)。结论成软骨相关miR-4287可能是一种与软骨退变相关的miRNAomiR-4287能调控人软骨细胞ADAMTS4表达，但不是通过靶向结合mRNA3'UTR的方式发挥作用，其具体机制有待进一步研究。关键词：骨关节炎;miR-4287;IL-1B;聚蛋

5、白多糖酶T;软骨细胞;作者简介：傅明，Ema订:ming_fu@126.com收稿日期：2017-04-14基金：国家自然科学基金资助项目(81572171)EffectofchondrogenesisrelatedmiR-4287onexpressionofaggrecanase-1inhumanchondrocytesSUNHongZHANGZhiqiHUANGZhiyuMAOGupingYUBaoxiZHANGChengyunFUMingDepartmentofJointSurgery,theFirstAffiliatedH

6、ospitalofSunYat-senUniversity;Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectandmechanismofmiR-4287,achondrogenesisassociatedmicroRNA,regulatedtheexpress!onofaggrccanascT(adisintcgrinandmetalloprotcinascwiththrombospondinmotif4,ADAMTS4)inhumanchondrocytes.MethodsFirst,thevol

7、untarilydonatednormalandosteoarthritickneearticularcartilageswereusedtodetecttheexpressionsofmiR-4287andADAMTS4mRNAbyreal-timefluoresceneequantitativePCR.Then,chondrocyteswereisolatedfromkneearticularcartilagcs.TheeffectofILTBontheexpressionofmiR-4287andADAMTS4mRNAwas

8、validatedbythefirstgenerationofosteoarthriticchondrocytes.ToconfirmtheinfluenceofIL-13signalpathwaysontheexpressionofmiR-428