核心蛋白聚糖抑制人软骨细胞mmp13基因表达的体外研究

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1、核心蛋白聚糖抑制人软骨细胞MMP13基因表达的体外研究陈亮，熊雁，王子明，王爱民（400042重庆，第三军医大学大坪医院野战外科研究所骨科）[摘要]　目的：通过对人正常关节软骨进行体外原代细胞培养，观察不同浓度的外源性核心蛋白聚糖（DCN，decorin）对软骨细胞胞外基质胶原蛋白酶（MMP13）和软骨细胞肥大化（CollagenX）的基因表达变化。方法：采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶结合消化法分离培养人透明软骨细胞；观察体外培养的软骨细胞形态，阿尔辛蓝染色和II型胶原免疫组化鉴定透明软骨细胞；从基因水平（实时定量

2、PCR）检测不同浓度的外源性DCN作用下透明软骨细胞对基质金属蛋白酶13（matrixmetalloproteases13，MMP13）、X型胶原(CollagenX)的基因表达变化。结果:①正常透明软骨细胞培养呈多角型，扁平状，换液培养5天时，细胞呈多边形，星形等，排列紧密呈“铺石板”样。②本法分离培养的原代透明软骨细胞的阿尔新蓝染色和II型胶原免疫组化均为阳性。③随着外源性DCN浓度的不断增大（对照组：0，A：2.5ug/mL，B:25ug/mL，C:250ug/mL），CollagenX的表达明显降低（

3、P<0.01）且成剂量依赖关系（A：0.78±0.03，B:0.71±0.04，C:0.63±0.01），MMP13的表达则在DCN高浓度组（250ug/mL）时明显降低（0.85±0.02，P<0.01）。结论：外源性DCN抑制透明软骨细胞的CollagenX的基因表达且成剂量依赖关系，对MMP13的基因表达则需在高浓度组（250ug/mL）时起明显抑制作用。表明外源性DCN可能通过抑制透明软骨细胞肥大化抑制软骨细胞MMP13的基因表达。[关键词]透明软骨细胞；核心蛋白聚糖；细胞外基质；基因表达Geneex

4、pressionofMMP13inhumanarticularchondrocyteswasinhibitedbyDecorininvitro.ChenLiang，XiongYan，WangZiming，WangAimin(DepartmentofOrthopedics，InstituteofSurgeryResearch，DapingHospital，ThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing，400042，China)[Abstract]Objective：Toinv

5、estigatethegeneexpressionchangesofextracellularmatrixcollagenase(MMP13)ofchondrocytesandhypertrophy(CollagenX)ofchondrocytesontheimpactofexogenousDCNwithdifferentconcentration，throughculturingprimarychondrocytefromnormalhumanarticularcartilageinvitro.Method

6、：Chondrocyteswereobtainedfromthearticularcartilagebydoubledigestionusingtrypsinaseandcollagenase.ChondrocyteswereidentifiedbyAlcianbluestainingandTypeⅡcollagenimmunohistochemistryinvitro.RNAwasisolatedfromculturedcellsandrelatedgene(MMP13andCollagenX)expres

7、sionlevelwasevaluatedbyrealtimePCRundertheimpactofexogenousDCNwithdifferentconcentration.Result：①Normalhyalinechondrocytesculturespresentedaspolygonalandflat；becamepolygonalandstarshapedthefifthdayofculturingwithchangingmedium，closelyarrangedas“stoneshop”.②

8、AlcianbluestainandTypeⅡcollagenimmunohistochemistrywerepositive.③AstheconcentrationofexogenousDCNincreasing（control：0，A：2.5ug/mL，B：25ug/mL，C：250ug/mL）,theexpressionofCollagenXsignificantlydecreased(P<0