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《反义rna体外抑制丙型肝炎病毒基因表达的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、反义RNA体外抑制丙型肝炎病毒基因表达的研究中华实验和临床病毒学杂志2004年l2月第l8卷4~ChineseJExpClinViral,December2004,Vol18,No.4反义RNA体外抑制丙型肝炎病毒基因表达的研究李勇年于敏吴炜强高建兴王洪纪绍平王勤环斯崇文【摘要】目的研究丙型肝炎病毒(HCV)基因调控方式及反义RNA对HCV基因表达的体外抑制作用.方法采用业已建立的HCV基因调控细胞模型,以重组质粒共转染策略,将反义RNA重组质粒与HCV5非翻译区(5uTR)调控的报道基因——虫荧光素酶
2、(1uc)重组质粒共同转染人肝癌细胞系(HepG2),并以不表达反义RNA的原核重组质粒和不含有HCV5UTR的luc重组质粒做为对照.转染细胞经短期培养后制备细胞提取液,荧光检测法检测luc基因的表达.结果针对HCV5uTR的反义RNA可以在体外有效抑制由HCV5uTR调控的luc基因的表达,并具有剂量依赖效应.对照重组质粒转染实验证明,上述抑制作用呈序列特异性.结论HCV5uTR具有调控下游目的基因表达的重要功能,反义RNA可以在体外有效抑制由HCV5uTR介导的病毒基因的表达.【主题词】肝炎病毒;
3、RNA,反义;基因表达调控InhibitionofhepatitisCvirusgeneexpressionbyantisensenucleotide/nvitrou~ng-nmn'.YUMin.WUWei-qiang,GAOJian-xing,ⅣGHong,JlShao-ping,ⅣGQin-huan,SIChong-wen."DepartmentofInfectiousDiseases,323HospitalofP,Xian710054,ChinaCorrespondingo7mr:LI~ng-nm
4、n,E-mail:yongnian@pub.xaonline.com【Abstract】ObjectiveTostudythemechanismofhepatitisCvirus(HCV)generegulationandtheinhibitoryeffectofantisenseRNAonHCVgeneexpressionnvitro.MethodsThehepatoblastomacellline(HepG2)wasco-transfectedbyrecombinantplasmidofantise
5、nseRNAcomplementarytoHCV5untranslatedreg"on(5UTR)andHCV5UTRDirectedluciferase(1UC)geneexpressionrecombinantplasmid.MeanwhileareversedHCV5UTRrecombinatplasnidwhichcannottranscribeasantisenseRNAinthecellandarecombinantplasmidinwhichthelUCwasregulatedbysimi
6、anvirus40(sv40)5UTRwereusedascontrolsrespectively.TheleveloflUCgeneexpressionwasdeterminedbyanenzymaticassay.ResultsTheantisenseRNAwhichdirectedtoHCV5UTRcouldobviouslyknockdowntheleveloflUCgeneexpressionandtheclose.dependentinhibitionofantisenseRNAwasobs
7、ervedatthesametime.HowevertheaboveinhibitionwasnotshowninthecellsCO.transfectedbyreversedHCV5UTRrecombinantplasmidandHCV5UTRdirectedlUCgeneexpressionrecombinantplasmid.NoreductionWSSobserredinlucgeneexpressionlevelinthecellc~transfectedbybotIlantisenseRN
8、ArecombinantplasmidandSV405UTRdirectedlUCgeneexpressionrecombinantplasmid.ConclusionHCV5Url'Rplaysanimportantroleinregulationofviralgeneexpression.TheantisenseRNAcomplementarytoHCV5UTRcouldeffectivelyinhibitthegeneexpressi
