fra-1和乳腺癌发生及侵袭转移相关性实验的研究

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1、军事医学科学院研究生学位论文独创性声明秉承军事医学科学院严谨的学风和科研作风，本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得芏奎堕堂盘堂瞳或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。论文作者签字：塑：聋签字日期：塑2年—上月』L日军事医学科学院研究生学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解芏圭堕堂盘堂堕有关保留、使用学位论文的规定。特授权芏主匡堂盘堂瞳可以将学

2、位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意将本学位论文的复印件和磁盘送交国家有关部门和机构。(保密学位论文在解密后适用本授权书)论：艾作者签字：起兰签字日期：独一年——￡月—生日擀籼签字：触豁嘴!Z⋯年』月』日博I‘论文中义摘要Fra．1与乳腺癌的发生及侵袭转移相关性的实验研究摘要Fra．1是转录因子AP．1家族中的一员，最近研究发现Fra．1过表达可促进细胞的运动、侵袭。在鼠成纤维细胞中过表达Fra-1可导致贴壁非依赖性生长以及恶性转化。在多种肿瘤如乳腺、肺、结肠以及转化的细胞系中检测到Fra．

3、1mRNA及蛋白水平的高表达。然而有关Fra-I在良、恶性乳腺组织中的表达、Fra-i是否增加肿瘤的侵袭和迁移，Fra-I调控哪些侵袭转移相关基因鲜有报道。本研究通过免疫组织化学方法检测Fra-I在良、恶性乳腺肿瘤中的表达差别，发现良、恶性乳腺肿瘤的细胞核和细胞质都存在Fra-I表达，但Fra-I在恶性肿瘤细胞质中的表达明显高于良性肿瘤，提示与乳腺癌的发生相关。统计学分析结果表明Fra-I在恶性肿瘤细胞质中的表达与乳腺癌预后指标ER、PR和HER2的表达均无相关性。RT-PCR及WesternBlot分析结果证实，高侵袭性的乳腺癌细胞中Fra-1mRNA及蛋白的表

4、达水平增高，低侵袭性的乳腺癌细胞中Fra-ImRNA和蛋白则低表达或不表达。随后，我们构建了Fra-I真核表达载体，在低侵袭性的MCF．7乳腺癌细胞中过表达Fra．1，通过集落形成实验、黏附实验、迁移实验观察Fra-1对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响。结果显示Fra-I可增加乳腺癌细胞的增殖、黏附和迁移能力，RT-PCR分析发现，Fra-1对AP．1部分家族成员有调控作用。为进一步研究Fra-I参与肿瘤侵袭迁移的机制，我们构建了pGL3一MMP．9启动子报告载体，分析Fra-I对侵袭转移相关基因MMP．9启动子活性的影响。双荧光素报告载体分析实验发现，Fra-I对MM

5、P．9的启动子活性无明显影响。重新对MMP．9启动子进行生物信息学分析，发现MMP．9启动子上AP．1反应元件(TRE)与转录因子Stat3的反应元件(SIE)相毗邻。再次应用双荧光素报告载体分析，发现Fra．1与Stat3协同参与了对MMP．9的启动子的调控，结果表明Fra-1协同Stat3明显增加了MMP．9的启动子活性。采用Fra-I、Stat3C共转染后明胶酶谱实验证实MMP．9的酶活性显著增高。通过免疫共沉淀实验证实Stat3与Fra．1／c．Jun存在相互作用；寡核苷酸pulldown实验证实，Stat3、Fra．I／c．Jun与含TRE和SIE的MM

6、P．9启动子序列在体外存在直接的相互作用。染色质免疫共沉淀结合PCR(ChIP．PCR)方法进一步确证，Stat3和Fra-l与含TRE元件及SIE博J。论文中义摘要元件的MMP．9启动子序列的原位结合。综上所述：(1)Fra-1在乳腺恶性肿瘤细胞质中的表达明显高于乳腺良性肿瘤，可能与乳腺癌的发生发展相关。(2)过表达Fra-I可增加乳腺癌细胞的增殖、黏附和迁移，提示Fra-1与乳腺癌的侵袭和迁移相关。(3)Fra-1协同Stat3调控侵袭转移相关基因MMP一9，Fra-1可能通过协同Stat3调控MMP．9，促进肿瘤细胞的侵袭和迁移。关键词：Fra-I；Stat

7、3；MMP．9；侵袭和迁移；乳腺癌博l：论文英立摘要AnassociationofFra-1withoncogenesis，invasivenessandmetastasisofbreastABSTRACTAproto-oncegene，Fra-1isaFosfamilymemberandanAP一1transcriptionfactorcomponent．EmergingevidencesuggestsanimportantroleforFra-1incellmotility,invasion，andprogressionofthetransformedstat

8、einse