nesfatin-1对多巴胺神经元的保护作用及机制探讨

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1、Nesfatin．1对多巴胺能神经元的保护作用及机制探讨摘要帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)是多发于中老年的神经系统退行性疾病，主要病理改变是中脑黑质(substantianigra，SN)致密带多巴胺(dopamine，DA)能神经元退行性变，从而导致纹状体(striatum，Str)释放的DA减少所致。虽然遗传、环境、氧化应激、细胞凋亡、炎症反应、蛋白质异常聚集等因素均参与PD的发病，但其确切病因尚不清楚。目前PD病人DA能神经元的保护性治疗途径主要包括铁离子去除途径、单胺氧化酶一B抑制途径、神经营养因子补充、抗氧化剂的

2、应用、神经移植、神经节苷脂途径等，但尚无行之有效的治疗办法可以阻止或者延缓DA能神经元的退行性变。因此，深入探讨PD的发病机制，针对PD病因筛选研发更有效的天然或人工合成药物成为PD研究的关键问题之～。Nesfatin．1是2006年发现的一种由82个氨基酸组成的脑肠肽，由胃底的X／A样细胞分泌，其主要功能是抑制摄食和参与能量代谢，新近研究发现它也可以参与调节生殖、应激反应、认知等过程，并与抑郁和焦虑、癫痫的发病有关。目前有研究发现nesfatin．1在大鼠蛛网膜下腔出血和脑外伤中通过抗凋亡机制发挥神经保护作用。由于其与脑肠肽ghrelin都由胃

3、底的X／A样细胞分泌，本课题组的前期研究工作已证实ghrelin对DA能神经元具有神经保护作用，那么，nesfatin-1对DA能神经元是否具有同样的保护作用?为了探讨这一问题，在l一甲基一4-苯基-1，2，3，6．四氢吡啶(1-methyl．4．phcnyl一1，2,3，6．tetrahydropyridin，MPTP)制备的亚急性PD／

4、、鼠模型上，通过高效液相色谱(highperformanceliquidchromatography，HPLC)检测了DA及其代谢产物的含量，免疫组织化学和免疫荧光技术观察了DA能神经元及其神经末梢的改变，蛋

5、白免疫印迹法检测了SN区酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase．TH)含量的改变，观察了nesfatin-1对DA能神经元的保护作用。并进一步在体外培养的DA能细胞系——MES23．5细胞上，应用l一甲基-4一苯基吡啶阳离子(1-methyl．4-phenylpyridilliumion，MPP+)制备PD的细胞模型，通过3一(4，5．二甲基噻唑．2)一2，5．二苯基四氮唑溴盐(3一(4，5)一dimethylthiahiazo(-z．y1)．3，5．di．phenytetrazoliumromide，MTT)法检测细胞存活率，流式

6、细胞术检测线粒体跨膜电位差(mitochondrialtransmembranepotential，AWM)和caspase一3活性的变化，werstemblot法检测细胞色素C(cytochromeC，CytC)含量及细胞外调节蛋白激酶(extracellularregulatedproteinkinases，ERKl／2)磷酸化的变化，细胞免疫化学检测细胞核形态学改变，来深入探讨nesfatin—l神经保护作用的机制。结果如下：1．在MPTP制备的亚急性PD模型小鼠中，Strl勾DA及其代谢产物二羟基苯乙酸(dihydroxyphenylac

7、eticacid，DOPAC)和高香草酸(homovanillicacid，HVA)的含量均降低，分别降低96．61％、85．51％和97．2％(P

8、时S仃区TH免疫阳性神经纤维末梢减少。100ng／IxL，200ng／pL，400ng／I．tLnesfatin．1预处理可拮抗MPTP造成的DA能神经元损伤，TH免疫阳性神经元数目分别恢复至正常对照组的100％，82％，80％(P<0．05)，TH蛋白表达分别恢复至正常对照组的100％，98％，95％(P

9、1(10。7～10‘13mol／L)预孵育后，可拮抗MPP+引起的细胞存活率的降低，分别为对照组的101．54％、114．39％、120