石菖蒲挥发油对AD模型小鼠神经元损伤的保护作用及机制探讨

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：__________UDC：___________石菖蒲挥发油对AD模型小鼠神经元损伤的保护作用及机制探讨姓名：高宁辛学号：2111548014院系：中药学院学位类型：学术学位专业：中药学研究方向：中药及复方药理和毒理的研究导师：龚梦鹃副教授论文提交日期：2018-05-24论文答辩日期：2018-05-18学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月广东药科大学硕士研究生学位论文Protectiveeffectandmechanism

2、ofvolatileoilfromAcorusgramineusonneuroninjuryinADmodelmiceCandidate：NingxinGaoStudentID：2111548014Affiliation：SchoolofChineseMedicineAcademicDegreeApliedfor：MasterofChineseMedicineSpeciality：PharmaceuticalAnalysisSupervisor：MengjuanGongassociateprofe

3、ssorAssistantSupervisor：DayofDefence：May2018Degree-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversity52018广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学硕士研究生学位论文石菖蒲挥发油对AD模型小鼠神经元损伤的保护作用及机制探讨摘要阿尔茨海默病（AD）是一种起病隐匿、原发性的神经系统退行性疾病，俗称老年痴呆，主要表现为渐进性语言、记忆障碍；人格改变；认知功能障碍等神经精神症状，严重影响患

4、者的职业生涯、正常社交及生活能力。其特征性病理改变主要有：β淀粉样蛋白（Aβ）沉积形成的细胞外老年斑、神经原纤维缠结（NFT）等。“Aβ假说”即由于机体代谢异常，不能被及时清除的Aβ蛋白在脑内特定区域沉积，引起神经元死亡，导致AD。石菖蒲，属天南星科植物，其干燥根茎亦称石菖蒲，味辛性温，具有开窍祛痰、除湿健胃、益智醒神的功效。在临床上常治疗癫痫、老年性痴呆、健忘症、中风失语等疑难杂症。石菖蒲的挥发油提取物在改善小鼠的学习、记忆方面具有显著功效。近年来，在神经系统方面，与石菖蒲相关的研究越来越多，而

5、石菖蒲挥发油对AD治疗作用的研究还较少。本研究用石菖蒲挥发油对AD模型小鼠进行实验研究，观察石菖蒲挥发油对AD模型小鼠神经元损伤的保护作用及可能的机制，为石菖蒲挥发油改善及治疗AD提供实验依据。I广东药科大学硕士研究生学位论文目的：本实验通过探讨石菖蒲挥发油对AD模型小鼠神经元损伤的保护作用，研究石菖蒲挥发油提取物对AD的改善作用及相关机制探讨。方法：药材为正品的石菖蒲干燥根茎，中草药粉碎机打碎成能过2号筛（20目）粗粉；每个1000ml的圆底烧瓶中加200g石菖蒲粗粉、1000ml水、5粒沸石，

6、静置浸泡1h，挥发油测定仪器提取，至石菖蒲挥发油不再增多，关闭加热套电源，停止加热。昆明小鼠随机分为正常组（空白对照组）、手术对照组、模型组（Aβ组）、治疗组，其中治疗组又分为治疗组IAβ+2.5μL石菖蒲挥发油/10gb.w.和治疗组IIAβ+5μL石菖蒲挥发油/10gb.w.两组。用脑立体定位仪，向模型组和治疗组小鼠大脑的双侧海马区，微量注射寡聚态Aβ1-42，建造AD小鼠模型；相同方法，手术对照组微量注射等量的生理盐水，正常组不做处理。造模七天后，新颖物体识别实验筛选出认知和记忆功能障碍的造

7、模成功小鼠，之后治疗组开始灌胃给药，治疗组I、II灌胃剂量分别为：2.5μL石菖蒲挥发油/10gb.w.和5μL石菖蒲挥发油/10gb.w.，手术对照组、模型组灌胃相同量生理盐水，连续灌胃三周；再次做新颖物体识别实验，行为学分析给药石菖蒲挥发油对各组小鼠的记忆和认知功能的影响。HE染色，观察各组海马区细胞形态变化。免疫组织化学（IHC）法，检测不同组小鼠海马内Aβ的沉积以及II广东药科大学硕士研究生学位论文DCX、Nestin、BDNF、TrkB、NT3的表达。Westernblot，检测Nest

8、in、DCX、BDNF、NT3、TrkB的表达。结果：1、新颖物体识别实验结果表明，正常组和手术对照组小鼠的认知指数无显著差异（P>0.05），而模型组小鼠的认知指数明显下降（P<0.01），表明其认知功能明显衰减；与模型组相比，治疗组小鼠的认知指数显著增加（P<0.05），提示治疗组小鼠的认知功能有所改善。2、HE染色结果表明，与正常组相比，手术对照组小鼠大脑海马区细胞并无严重损伤，仅针道附近细胞排列紊乱；与正常组和手术对照组相比，模型组小鼠大脑海马区损伤严重，海马齿状回细胞形态