梅鱼酶解多肽的分析及功能性研究

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1、浙江工商大学硕士学位论文梅鱼酶解多肽的分析及功能性研究姓名：任明申请学位级别：硕士专业：水产品加工及贮藏工程指导教师：戴志远20080201浙江工商大学硕士学位论文梅鱼酶解多肽的分析及功能性研究摘要梅鱼作为海洋低值鱼类，是我省海洋捕捞的主要对象之一。梅鱼中蛋白含量高，目前这一蛋白资源尚未得到高值化或工业化利用。利用梅鱼蛋白酶解制备活性多肽，可充分利用这部分蛋白资源，提高其产品价值。本课题主要以梅鱼蛋白制备的多肽为原料，分析多肽的理化性质，利用电泳对酶解多肽的分子量和等电点进行了测定。并通过多种分离手段对酶解多肽进行了分离纯化，对多肽的血管紧

2、张素转化酶抑制活性、抗氧化活性进行了研究。理化性质的研究结果表明：多肽的粗蛋白含量较高，粗脂肪含量相对偏低，‘仅为0．32％。梅鱼多肽具有良好的溶解性和高浓度下的低粘度特性。氨基酸组成分析表明，梅鱼多肽中的必需氨基酸含量丰富，总含量为47．41％。其中，赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸+胱氨酸及苯丙氨酸+酪氨酸的含量显著高于FAO／WH0参考模式的建议值。选用SephadexG．10对多肽进行脱盐处理。之后分别采用SDS—PAGE、Tricine—SDS．PAGE以及等电聚焦电泳测定了梅鱼多肽的分子量和等电点。结果表明：较之

3、SDS．PAGE，Tricine．SDS．PAGE对小分子和复杂体系的分离效果较为理想；凝胶总浓度为16．5％、交联度为5％的Tricine．SDS—PAGE系统分析酶解多肽的成分主要是分子量小于14．4kDa的多肽；梅鱼多肽主要由等电点小于7的酸性多肽组成。采用超滤、凝胶色谱、离子交换柱层析对梅鱼多肽进行分离，并在分离每步测定各组分的ACE抑制活性。梅鱼多肽最初的ACE半抑制浓度为0．203mg／ml。多肽经截留分子量为1000Da、5000Da、10000Da的膜超滤后，得到四个组分。其中组分I具有最大的ACE抑制活性，IC50为0．1

4、76mg／ml。组分I经．SephadexG一25凝胶色谱分为Ia、Ib、Ic、Id四个组分。其中组分Ia无ACE抑制活性，组分IdACE抑制活性最高，IC50为0．088mg／ml。组分Id经DEAE阴离子交换柱进一步分为两个组分，即Id(1)和Id(2)，其IC50分别为0．084mg／ml署1]O．080mg／ml。此外，还对梅鱼多肽的进行了体外抗氧化研究。结果表明，多肽对DPPH有明显的清除作用，并呈现良好的量效关系。烷基自由基氧化体系中，MDA半数抑制浓度为9．8mg／mL。脂质过氧化体系中，多肽对亚油酸氧化有明显的抑制作用。羟基

5、和超氧阴离子氧化体系中，呈负清除作用。关键词：梅鱼；多肽；电泳；ACE；抗氧化；营养浙江工商大学硕士学位论文STUDYoNTHEANALYSISANDFUNCTIoNALPRoPERTYoFTHEENZYMATICPoLYPEPTlDESFRoMSMALLMISCELLANEoUSFISHABSTRACTThesmallmiscellaneousfishasaloweconomicvaluemarinefishhasbecomeonekindofmainmarinecapturefisheriesofZhejiangprovince．The

6、smallmiscellaneousfishisrichinprotein．Atpresent，theproteinshaven’tbeenusedwidelyandindustrially．Preparationofpolypeptidesbyhydrolyzingsmallmiscellaneousfishproteincanfullyusetheproteinresourceandenhanceitsproductvalue．Inthisdissertation，thephysicalandchemicalproperties，ami

7、noacidcompositionandnutritionalvalueofthepolypeptidespreparedljrom-一一一一smallmiscellaneousfishproteinweredetermined．Themolecularweightdistributionandiso—electricpointofthepolypeptidesweredeterminedbyelectrophoresis．TakingtheACEinhibitoryactivityasanindex,thepolypeptideswere

8、purifiedthroughultra-filtration，gelchromatographyIV浙江工商大学硕士学位论文andionexchangechromatograp