agesrage轴调控wntβ-catenin促进人主动脉平滑肌细胞钙化

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1、目录1AGEs／RAGE轴调控wnt／13．catenin促进入主动脉平滑肌细胞钙化⋯···⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·11．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯·⋯⋯·00600⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯191．6讨论⋯·····⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯··⋯·····⋯⋯⋯·······⋯··32i．7结{仑·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··OO0O0mQO

2、0⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯···371．8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯381．9英汉缩略词对照表⋯00Q00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯412致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯433AGEs／RAGE轴调控wnt／13．catenin促进糖尿病动脉中膜钙化机制的研究进展(综述)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45AGEs／RAGE轴调控wnt／13．catenin促进人主动脉平滑肌细胞钙化摘要目的：探讨RAGE是否具有促进动脉平滑肌细胞钙化的功能，明确RAGE与wnt／p．catenin信号通路的关系，探讨RAGE与人动脉平滑肌细胞向成骨性细胞转化的潜在关

3、系。方法：(1)通过慢病毒颗粒载体介导的RAGEORF感染细胞，以建立稳定高表达RAGE蛋白的细胞模型。绿荧光蛋白表达、流式细胞技术及免疫印迹法检测验证细胞稳定高表达RAGE蛋白。(2)将正常条件下培养的人主动脉平滑肌细胞作为空白对照组，分为空白对照组、未转染慢病毒组，空载体慢病毒转染组、携带RAGE慢病毒转染组，对未转染慢病毒组，空载体慢病毒转染组、携带RAGE慢病毒转染组分别以10mmol／L[3．甘油磷酸、丙酮酸和20mmg／LAGE共同作用下对各组人主动脉平滑肌细胞进行干预培养，倒置相差显微镜下观察各组细胞生长情况及钙化情况，第10天时对各组细胞进行冯库萨染色和钙定量检测。(

4、3)将正常条件下培养的人主动脉平滑肌细胞作为空白对照组，分为空白对照组、空载体慢病毒转染组、RAGE高表达细胞组，分别以10mmol／L13．甘油磷酸、丙酮酸和20mmg／LAGE共同作用下对各组人主动脉平滑肌细胞进行干预培养，利用westernblotting检测干预前和干预后各组细胞与成骨相关蛋白的表达情况。(4)利用小分子干扰RNA对细胞13-catenin的表达进行干扰，从而获得13-catenin低表达细胞模型。仍然以正常条件下培养的人主动脉平滑肌细胞为空白对照组，将实验分为空白对照组、RAGE高表达细胞干预培养组、对照siRNA组以及13-cateninsiRNA抑制组，

5、对经13-cateninsiRNA1处理过的细胞组进行干预培养。利用蛋白印迹技术对各组细胞OPG、cabfal的表达进行检测。结果：(1)绿荧光蛋白表达、流式细胞技术及免疫印迹法检测结果证实RAGE高表达人主动脉平滑肌细胞模型成功建立。(2)与空白对照组、未转染慢病毒组，空载体慢病毒转染组相比，在钙化+AGEs干预培养下，携带RAGE慢病毒转染组的钙化程度增强。(3)空白对照组、空载体慢病毒转染组、RAGE高表达细胞组三组细胞在进行干预培养后，RAGE、13-catenin、OPG、cabfal蛋白表达较未干预均增强，其中RAGE高表达组细胞中上述因子的表达远强于其他各组。(4)与R

6、AGE高表达细胞组和对照siRNA细胞组相比，13-cateninsiRNA抑制组细胞经13-cateninsiRNA处理后再进行干预培养，发现其下游基因cabfal和OPG的表达明显受到了抑制。结论：1．RAGE高表达促进VSMCs钙化，同时促进了13-catenin、OPG、cabfal等下游基因的表达；2．RAGE可能是通过Wntl3．catenin途径，启动其下游因子，而促进血管平滑肌细胞成骨转化，从而进一步导致钙化增加；3．RAGE引起的OPG、cabfal表达增强，钙化增加，可被13-cateninsiRNA所抑制。关键词：AGE(糖基化终末产物)；13-catenin(

7、p．连环蛋白)；动脉中膜钙化；血管平滑肌细胞2AGEs／RAGEmediatewnt／beta·cateninsignalingtopromotehumanaorticsmoothmusclecellscalcificationindiabetesmellitusAbstract：Objective：1．ToinvestigatewhethertheRAGEhasthefunctiontopromotearterialsmoothmusclecellsca