agesrage轴通过p38mapkjnk信号通路促进人主动脉平滑肌细胞凋亡

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1、四纠匡型太堂亟土堂僮途塞目录lAGEs／RAGE轴通过p38MAPK／JNK信号通路促进人主动脉平滑肌细胞凋亡OODlll11．1中文摘要11．2英文摘要41,3前言81．4材料与方法0100oloo0121．5结果221．7结论441．8参考文献451．9英汉缩略词对照表522致谢533AGEs／RAGE轴在促进血管细胞凋亡在血管钙化中的作用及机制的研究进展(综述)54万方数据四川医科大学硕士学位论文AGEs／RAGE轴通过p38MAPK／INK信号通路促进人主动脉平滑肌细胞凋亡摘要目的：血管平滑肌细胞的凋亡在血管钙化中的作用受到越来越多

2、的重视。研究表明，在动脉粥样硬化斑块中凋亡的血管平滑肌细胞明显增多；在慢性肾病患者体内由于钙磷代谢紊乱，产生的大量磷酸钙晶体被血管平滑肌细胞吞噬，再通过细胞溶酶体作用而被降解，引起细胞内钙、磷水平急剧升高，导致细胞凋亡，继而形成凋亡小体，这些凋亡小体可作为血管基质矿化的核点启动钙化过程。晚期糖基化终末产物(advancedglycationendproducts，AGEs)是一组由体内糖的醛基与蛋白质的氨基相互作用生成的一种带电荷的氨基酸残基，生理状态下机体内AGEs表达很低。生物体内AGEs通过与相应受体相结合后发挥生物学作用，目前研究最

3、多的受体为RAGE(receptorforadvancedglycationendproducts)。本研究拟探究AGEs在入主动脉平滑肌细胞(HASMCs)凋亡中的作用、是否通过AGEs-RAGE(配体一受体结合方式)来发挥生物学效应以及相关信号通路的分子机制。一方法：原代培养入主动脉平滑肌细胞，取第3-5代细胞进行试验。用不同浓度AGEs—BSA(50mg／L、lOOmg／L、200mg／L)刺激细胞48h后，流式细胞仪检测HASMCs的凋亡，Westernblot检测细胞中促凋亡相关蛋白p53、BAX、Caspase3，抗凋亡相关蛋白

4、p65、Cox一2、Bcl2以及RAGE蛋白表达情况。为确定RAGE在AGEs促细胞凋亡中的作用，分别构建人过表达和沉默RAGE基因的慢病毒载体，分别将其转染至HASMCs，Westernb万方数据lot和q-PCR检测成功达到不同RAGE蛋白表达效率的HASMCs后，予以AGEs—BSA刺激，流式细胞仪检测表达不同水平RAGE蛋白的HASMCs的凋亡，Westernblot检测相应细胞中促凋亡相关蛋白p53、BAX、Caspase3，抗凋亡相关蛋白p65、Cox一2、Bcl2的表达情况。为明确p38MAPK、7NK途径是否参与细胞凋亡过程

5、，给予AGEs-BSA刺激细胞不同时间(6h、12h、24h、48h)后，Westernblot检测HASMCs的JNK和p38MAPK磷酸化产物的活化情况；为继续验证p38MAPK、JNK途径的作用，分别弓l入iNK抑制剂sp600125和p38MAPK抑制剂SB203580干预细胞，再次运用流式细胞仪检测HASMCs的凋亡，Westernblot检测细胞caspase3蛋白表达情况。结果：成功培养人主动脉平滑肌细胞，分别予以不同浓度(50mg／L、lOOmg／L、200mg／L)AGEs～BSA刺激48h后，细胞凋亡呈浓度依赖性增加，凋

6、亡率分别为8．43％、12．49％、24．90％；HASMC中促凋亡相关蛋白p53、BAX、Caspase3表达呈浓度依赖性增加，抗凋亡相关蛋白p65、Cox一2、Bcl2表达呈浓度依赖性降低；HASMCs中RAGE蛋白表达呈浓度依赖性增加。构建过表达／沉默RAGE基因的HASMCs稳定细胞株，各株细胞绿荧光蛋白成功表达；RAGE基因过表达细胞中RAGE蛋白表达水平明显高于对照组(0。97±0．02vsO．44±0．01，p

7、默细胞中(RAGE-shRNA一3沉默细胞后细胞活性明显受到抑制，在转染24h内基本死亡)RAGE蛋白表达水平咀显低于对照组(0．56±O．02，0．86±0．Olvsl．25±0．02，p

8、—cDNA组细胞中促凋亡蛋白p53、BAX、caspase3的表达较对照组显著增加(0．84±0．01vsO．44±O．01，1．64±0．01vs0．72±0。02，0．83±