neuropilin-1单克隆抗体抑制胶质瘤生长的实验研究

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1、厦门大学硕士学位论文Neuropilin--1单克隆抗体抑制胶质瘤生长的实验研究姓名：唐小勇申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：陈陆馗201205摘要背景N唧ilnl(NRP一1)属于跨膜糖蛋白，作为轴突导向因子(S锄apho血，S锄a)的受体，在神经细胞导向、轴突生长方面发挥调节作用。近年来，大量研究结果显示NI冲．1可表达于新生血管的内皮细胞和多种肿瘤细胞。NI冲．1在胶质瘤的各个发展阶段都有较高的表达，并影响肿瘤的发生发展。研究表明，NRP．1作为跨膜糖蛋白，在胶质瘤内涉及独立的细胞信号通路；N

2、I心．1对胶质瘤细胞的增殖、迁移和转移具有抑制作用。目的制备高纯度和高特异性的NI心．1单克隆抗体(NRP一1MAb)；检测胶质瘤细胞株U25l、U87、C6及胶质瘤组织中NRP—l蛋白的表达情况；研究NRP．1MAb对胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等的抑制作用；探讨NI心．1MAb在胶质瘤裸鼠模型的肿瘤靶向作用和抑制效应。方法利用Ball)／c鼠生产NI冲．1MAb，rProteinA纯化抗体，ELISA鉴定活性。培养胶质瘤细胞株U251、U87和C6，免疫印迹法(wbst锄blot)及细胞免疫组化检测N

3、RP一1蛋白在胶质瘤细胞株和胶质瘤组织的表达。细胞抑制实验、划痕实验、仃an刚ell实验等研究NI冲．1MAb对胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等的作用。荧光素标记Ⅻ心．1MAb后，进行胶质瘤裸鼠模型(U87)的活体成像，观察NI心．1MAb的肿瘤靶向性。用NRP．1MAb治疗胶质瘤裸鼠模型(U87)，观察肿瘤的生长情况。结果rProteiIlA纯化的Nl冲。lMAb纯度高达95％，滴度l×lO也5×lO．6。胶质瘤细胞株(U25l、U87、C6)的West锄blot实验结果显示，NRP．1MAb能特异结合N

4、l廿．1蛋白；细胞免疫荧光染色显示Nl冲．1MAb定位于细胞膜。体外细胞实验结果显示，Nl心一1MAb对胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭具有抑制作用。胶质摘要瘤裸鼠模型(U87)的活体成像显示，NRP．1MAb能特异靶向肿瘤组织：治疗‘实验表明M强．1M舳对胶质瘤的生长有抑制作用。结论1．本实验成功制备了高纯度和高特异性的NI冲．1MAb。2．NRP．1蚴能结合在胶质瘤细胞株(U251、U87、C6)的细胞膜上。3．NI冲．1MAb对胶质瘤细胞的增殖、迁移、转移等有抑制作用。4．NI冲．1MAb具有肿瘤靶向性

5、和抑制肿瘤生长的效应，为深入开展胶质瘤靶向治疗的研究奠定了基础。关键词N肌ropilnl；单克隆抗体；胶质瘤；抑制作用nAbs订actAbstractNe眦．0pil靠l(NRP—1)isa120_130l(Dasin醇esp锄ing仃alls-membr锄eglycoprotein，wllichisdesc曲edasaco—rec印torinlplicatedinneuroI“guidancematb伽lndsm即如ersofthesemaphoriIls向[Ilily．NRP-“sexpressed0

6、nendonlelialceUsandvarioustllmorcells，sIlch嬲酉iomacells．The0、，e卜expressionofNI蹬一lin出iomaiscorrelatedwitlltumorpro笋ession，血鲫ionandmetaStaSis，tllerefore，llseofmonoclonal强tibodiesta曙etingNRP一1maybeaneff＆tiVeanti·glio】mtllerapeuticS仃ategy．objec晰e：T0pr印are趾dcha

7、racterizeNRP—l地址；t0detectmeeXpressi0璐ofNRP·lon酉iomacelll硫s(U25l，U87andC6)踟1d西ioma缸smes；toinVesdgatemee虢ctofNRP一1MAb0n百iomacelll幽s觑1，f细andthee丘＆ton姗dcInicebea血g酉iomatumorⅣ87)切V如D．Methods：NRP·1MAbw嬲produced矗．onl勰citesofBalb／c血ceandp谢fiedby印roteinAcolum．SDS—

8、PAGE扣1dindirectEUSAwereusedtoch锄ct毗Ee也epur时andtitersofmeNRP-1MAb．TheexpressioIlsofNRP—lon酉iomaceUlinesand西ioma6ssuesweredetectedbyWest锄b10t，功mnmofluoresceIlcestainingandImmunoc”ocheIIlis仃ystaining．MTr，thescralchtest