知母皂苷aⅲ抑制人脑胶质瘤增殖生长的机制研究

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1、知母皂苷AⅢ抑制人脑胶质瘤增殖生长的机制研究　　[摘要]考察知母皂苷AⅢ抑制人脑胶质瘤U87MG细胞增殖的作用及机制分析。在裸鼠皮下荷瘤模型中，知母皂苷AⅢ组与模型组相比，显著降低瘤重。知母皂苷AⅢ呈剂量依赖性抑制U87MG细胞的体外增殖；呈剂量依赖性降低βCatenin，CyclinD1，Bcl2的蛋白表达，同时升高p21在蛋白和基因水平的表达；降低ERK磷酸化水平，抑制βCatenin的核转移，同时提高p38和JNK蛋白的磷酸化水平。联用JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB203580后可逆转知母皂苷A

2、Ⅲ处理而提高的p21和降低的βCatenin的蛋白表达。知母皂苷AⅢ部分通过干预MAPK及Wnt/βCatenin信号通路而抑制脑胶质瘤U87MG的增殖。　　[关键词]知母皂苷AⅢ；人脑胶质瘤U87MG；细胞增殖；MAPK信号通路；Wnt/βCatenin信号通路　　[Abstract]ToexploretheinhibitoryeffectoftimosaponinAⅢontheproliferationofhumanglioblastomacelllineU87MGandinvestigateitsrelated

3、mechanismAscomparedwiththemodelgroup，thetumorweightwassignificantlyreducedintimosaponinAⅢtreatedgroupTimosaponinAⅢinhibitedtheproliferationofU87MGcelllineinadosedependentmannerItupregulatedthegeneandproteinexpressionlevelsofp21，meanwhileinhibitedtheproteinexpre

4、ssionlevelsofβCatenin，CyclinD1andBcl2ItalsoinhibitedthetranslocationofβCateninintonucleus，suppressedthephosphorylationexpressionofERK，butincreasedthephosphorylationexpressionofp38andJNKCombineduseofJNKinhibitorSP600125andp38inhibitorSB203580coulddecreasep21andi

5、ncreaseβCateninproteinexpressionsTimosaponinAⅢinhibitedtheproliferationofhumanglioblastomacelllineU87MGpartlybyinterveningMAPKandWnt/βCateninsignalpathways　　[Keywords]timosaponinAⅢ；humanglioblastomacellU87MG；cellproliferation；MAPKsignalpathway；Wnt/βCateninsigna

6、lpathway　　中?知母是百合科植物知母AnemarrhenaasphodeloidesBge的干燥根茎，具有滋阴润燥、清热泻火等功效。其性寒，味苦，归肺、胃、肾经，临床用于外感热病、骨蒸潮热、肺热燥咳、高热烦渴等症状[1]。其主要药理活性成分知母皂苷在知母根茎中的质量分数约为6%[2]。国内外研究人员发现知母皂苷AⅢ能抑制ADP诱导的血小板聚集、诱导肿瘤细胞自噬等[34]，近年来对于知母皂苷AⅢ抗肿瘤活性的研究日益深入[57]，有希望将其开发成一种新的抗癌类药物。　　脑胶质瘤（脑胶质细胞瘤）约占颅内肿瘤的70%

7、。恶性脑胶质瘤是34岁以下肿瘤患者的第二位死亡原因，患者平均存活的中位时间是14个月。脑胶质瘤多呈侵袭性生长，总体疗效不佳，是神经外科治疗中最棘手的难治性肿瘤之一[810]。目前尚未有知母皂苷AⅢ抑制脑胶质瘤增殖生长的相关报道。该文考察知母皂苷AⅢ体内外抑制脑胶质瘤增殖生长的作用并基于MAPK信号通路和Wnt/βCatenin信号通路考察其机制。　　1材料　　11药物与试剂知母皂苷AⅢ、淫羊藿苷Ⅱ、红景天苷、原薯蓣皂苷元均购自上海同田生物技术股份有限公司；人脑恶性胶质瘤细胞株U87MG购自美国ATCC公司；DMEM干

8、粉培养基、胎牛血清购自Gibco公司；二甲基亚砜、噻唑蓝购自西格玛奥德里奇（SigmaAldrich）公司；cDNA逆转录试剂盒、Trizol试剂购自赛默飞世尔科技（ThermoFisherScientific）公司；RealMasterMix（SYBRGreen）试剂盒、蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂PhosSTOP均购自美国Roche公司；引物