探讨npm1突变对白血病细胞化疗敏感性的影响及其分子机制

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1、重庆医科大学硕士学位论文探讨NPM1突变对白血病细胞化疗敏感性的影响及其分子机制姓名：覃凤娴申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：张伶201205重庆医科大学硕士研究生学位论文探讨NPMl突变对白血病细胞化疗敏感性的影响及其分子机制中文摘要第一部分探讨NPMI突变对白血病细胞化疗敏感性的影响核仁磷酸蛋白(nucleophosmin，NPMl)突变是急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia，AML)中发生频率最高的基因改变。临床研究发现，携删突变的白血病患者对化疗敏感，预后良好，但其具体机制尚未阐明。为探

2、讨MW』突变对白血病细胞化疗敏感l生的影响，将携带NPMlA型突变(NPMlmA)的重组质粒载体pEGFPCI一NPMlmA转染白血病THP．1细胞系，构建稳定表达NPMlmA蛋白的细胞株(THP．1mA)，同时设立空载体转染组(THP．1C1)和未处理组(THP．1)为对照。MTT实验确定化疗药物柔红霉素(DNR)及阿糖胞苷(Ara．C)的工作浓度及作用时间。FCM检测细胞凋亡率。qPCR及Westernblot检测凋亡相关蛋白BaX和Bcl．2的mRNA并I蛋白表达水平。结果发现，在O．25pM的DNR及8．5taM的Ara

3、。C作用24h后，与对照组细胞比较，THP．1mA细胞的凋亡率显著增高(p

4、调控白血病细胞对化疗药物的敏感性。为进一步探讨其分子机制，构建稳定表达NPMl突变蛋白的白血病细胞株THP．1mA，同时设立空载体转染组(T唧．1C1)和未处理组(THP．1)为对照。双荧光素酶报告基因检测各组细胞NF．vd3的活性；免疫共沉淀(IP)检测NPMl突变蛋白与NF．vd3的结合能力。观察NF．vd3激活剂(fNF．u)作用THP．1mA细胞后，细胞凋亡率、凋亡相关蛋白Bax和Bcl．2的mRNA和蛋白表达水平的改变。此外，qPCR检测miR．29b及其靶基因Mcl—J的mRNA水平，Westernblot检测Mcl

5、．1的蛋白水平。结果发现，与对照组比较，THP．1mA组细胞在DNR和Ara．C作用下其NF—KB蛋白的活化受阻，维持其较低的转录活性；IP实验显示大量NF．KB在胞浆中与NPMl突变蛋白结合。在TNF-cc刺激之后，THP．1mA细胞凋亡率显著下降(p<0．05)，BaxmRNA及1重庆医科大学硕士研究生学位论文蛋白表达水平明显下调(p

6、在TNF—C【刺激后，miR．29b表达水平显著下调(p

7、EUKEMIACELLSANDlTSMOLECULARMECHANISMSABSTRACTPARTITheeffectofⅣ舢mutationsonleukemiacellsresponsetochemotlierapeuticalagentsNucleophosmin州PMl、)mutationshavebeenidentifiedasthemostcommongeneticlesionsin、adultAMLpatients．ThedatafromclinicalstudiesindicatethatAMLwithNPMlm

8、utationisgenerallyassociatedwithgoodresponsetoinductionchemotherapy．However，themechanismsunderlyingthischemosensitivityarestillunkn