Endocan沉默对髓系白血病细胞化疗药物敏感性的影响研究

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1、分类号：R733.7单位代码：10159密级：公开学号：201210219博士学位论文中文题目：Endocan沉默对髓系白血病细胞化疗药物敏感性的影响研究英文题目：TheeffectsofEndocanexpressionsilencingonchemosensitivityinmyeloidleukemiacells论文作者：孙玲玲指导教师：杨威教授学科专业：内科学完成时间：2018年11月中国医科大学博士学位论文中国医科大学博士学位论文Endocan沉默对髓系白血病细胞化疗药物敏感性的影响研究TheeffectsofEndocanexpre

2、ssionsilencingonchemosensitivityinmyeloidleukemiacells论文作者孙玲玲指导教师杨威教授申请学位医学博士培养单位第二临床学院一级学科临床医学二级学科内科学研究方向血液内科论文起止时间2016年1月—2018年11月论文完成时间2018年11月中国医科大学（辽宁）2018年11月中国医科大学博士学位论文中国医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：本论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究成果，论文中除加以标注的内容外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得其

3、他学位而使用过的成果。对本研究提供贡献的其他个人和集体均已在文中进行了明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：2018年11月20日中国医科大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密（），在年后解密适用本授权书。（保密：请在括号内划“√

4、”）论文作者签名：指导教师签名：日期：2018年11月20日日期：2018年11月20日中国医科大学博士学位论文摘要目的：研究Endocan沉默对人髓系白血病细胞株增殖、细胞周期、凋亡和化疗药物敏感性的影响，并探讨其作用机制。研究方法：通过RT-PCR和Westernblot筛选出Endocan表达量相对较高的两株人髓系白血病细胞株（U937、K562）。构件Endocan-shRNA慢病毒载体，转染至U937、K562白血病细胞株，通过RT-PCR和Westernblot确定该慢病毒载体能抑制细胞Endocan表达。用CCK-8法、Weste

5、rnblot、流式细胞术检测Endocan表达沉默对U937、K562细胞增殖、细胞周期、凋亡的影响。CCK-8法选择出5-FU的IC50值，来处理U937、K562细胞，流式细胞术检测Endocan表达沉默对U937、K562细胞化疗药物敏感性的影响。同时Westernblot检测凋亡相关蛋白的变化。用稳定转染的K562白血病细胞建立白血病动物模型，进一步研究Endocan表达沉默在动物体内成瘤机制。观察实验鼠肿瘤生长情况，HE染色和TUNEL法观察细胞凋亡、坏死情况，免疫组化法分析PCNA、CyclinD1的表达，Westernblot检测

6、肿瘤组织中凋亡相关蛋白。通过Westernblot检测NF-κB、P65、p-P65、NF-κBinhibitoralpha(IκBα)、p-IκBα、核P65的表达。EMSA测定NF-κB的DNA结合活性。结果：人髓系白血病细胞株U937、K562中Endocan表达量相对高，成功建立Endocan-shRNA慢病毒载体，该载体能有效沉默Endocan基因表达。Endocan表达沉默，能够下调PCNA表达，抑制U937、K562细胞增殖；使CyclinD1表达下降，细胞发生G1期阻滞；抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降，促凋亡蛋白Bax、caspa

7、se-3、caspase-9、cleavedPARP表达增加，从而促进白血病细胞凋亡。Endocan表达沉默，可增强U937、K562细胞对5-FU药物的敏感性。进一步通过白血病动物实验发现，Endocan沉默可加强5-FU对肿瘤生长的抑制作用。HE染色和TUNEL法显示Endocan沉默与5-FU可使细胞凋亡增加，两者共同作用细胞凋亡最严重。免疫组化显示，Endocan沉默与5-FU可使细胞PCNA、CyclinD1表达下降，两者共同作用细胞PCNA、CyclinD1的表达最低，并且Endocan沉默可增强5-FU对凋亡相关蛋白的表达调控。此

8、外，我们还发现，沉默Endocan表达，可通过NF-κB抑制剂α（IκBα）表达的增加、p-κBα、p65和核p65表达的降低以及NF-κBDNA结合