左卡尼汀对高渗盐水诱导的小鼠干眼模型眼表保护作用的初步研究

《左卡尼汀对高渗盐水诱导的小鼠干眼模型眼表保护作用的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、第三军医大学硕士学位论文左卡尼汀对高渗盐水诱导的小鼠干眼模型眼表保护作用的初步研究姓名：霍剑申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：谢汉平201205第三军医大学硕士学位论文左卡尼汀对高渗盐水诱导的小鼠干眼模型眼表保护作用的初步研究半摘要背景与目的：干眼病(dryeyedisease)，又称角结膜干燥症(keratoconjunctivitissicca)或者泪液功能不全综合征(dysfunctionaltearsyndrome)，是指任何原因引起的泪液质和量异常或动力学异常导致的泪膜稳定性下降，并伴有眼部不适，导致眼表组织病变为特征的疾病总称，是最常见的眼表疾病。干眼病严重影响患者的生

2、活质量。干眼病患者的泪液渗透压显著升高，其渗透压为(326±22．1)mOsmol／L，正常人泪液渗透压为(302±9．7)mOsmol／L。用316mOsmol／L作为干眼病的诊断指标，其敏感性和特异性优于任何其它的干眼病诊断指标。目前干眼病的治疗以人工泪液滴眼为主，通过提高泪膜稳定性，在一定程度上能缓解干眼病患者临床症状和体征，但对中、重度干眼病的治疗效果不佳。自体血清作为有效的泪液替代物，无防腐剂、无抗原性，能促进结膜、角膜上皮增殖分化而应用于中、重度干眼病的治疗，但其保存受限。因此，从于眼病发病机制出发，研发一种有效治疗干眼病的药物并应用于临床是急待解决的问题。左卡尼汀是一种极性

3、分子。文献证实，左卡尼汀具有渗透保护的作用。哺乳动物眼表组织中，左卡尼汀在晶状体中浓度最高，在玻璃体中浓度最低，兔的双眼局部应用左卡尼汀膏剂后，角膜中左卡尼汀含量显著增加。Pescosolido等证实人的泪液中存在左卡尼汀及其衍生物，干眼病患者泪液中左卡尼汀浓度显著下降，作者建议使用含左卡尼汀成分的滴眼液来缓解干眼病患者眼表上皮细胞的损害。研究表明，左卡尼汀对高渗(400mOsmol／L)培养基中的角膜上皮细胞具有渗透保护的作用。左卡尼汀作为生理性补充或药物在眼科的研究中证实，1％浓度为其最佳剂量。目前，局部应用左卡尼汀对干眼病角膜和结膜上皮细胞是否具有保护作用尚未见文献报道。本实验在课

4、题组前期高渗盐水点眼制作小鼠干眼模型的基础上，初步探讨局部应用左卡尼汀是否具有减缓小鼠干眼模型眼表损害的作用。方法：1．动物的选择与分组6～8周龄雌性BALB／c小鼠60只，随机数字表法分为高渗‘本课题获国家自然科学基金(81172873)资助7第三军医大学硕士学位论文盐水滴眼组(HO组)，高渗联合等渗盐水滴眼组(HO+IO组)，高渗盐水联合1％左卡尼汀滴眼组(HO+1％LCA组)。每组20只，双眼取用。对HO组采用500mOsmol／L氯化钠溶液滴眼，每天5次；对HO+IO组，先滴308mOsmol／L氯化钠溶液，30min后，再滴500mOsmol／L氯化钠溶液，每天各滴眼5次；对H

5、O+I％LCA组，先滴1％左卡尼汀滴眼液，30min后，再滴500mOsmol／L氯化钠溶液，每天各滴眼5次。持续滴眼28天。2．1％左卡尼汀滴眼液的制备：左卡尼汀粉剂溶于注射用水，氯化钠粉剂调节渗透压至308mOsmol／L，盐酸调节pH值至7．0。30目液分泌量的测定采用SchirmerI方法测定BALB／c小鼠泪液的分泌量。在裂隙灯显微镜下，使用显微镊夹住酚红棉线，放置于BALB／c小鼠眼睛的外眦部，60s后取出，用毫米刻度尺测量酚红棉线湿润的长度。4．角膜荧光素染色与评分用微量加液器在BALB／c小鼠下方结膜囊内滴入lul5％荧光素钠溶液，3min后，裂隙显微镜下用钻蓝光进行检查

6、，并照相记录。5．泪液蕨类实验采用自制毛细玻璃管采集BALB／c小鼠下穹隆部泪液，涂在洁净的载玻片上，室温干燥，在48h内光学显微镜下进行蕨类结晶图像分析，并照相记录。6．角膜和结膜上皮的组织学观察采用苏木精伊红染色在光学显微镜下观察角膜上皮形态。采用图像分析软件测量中央角膜上皮厚度。取上方穹窿部结膜，采用过碘酸一Schiff染色，在光学显微镜下观察上方穹窿部结膜上皮的形态。计算每个高倍视野下杯状细胞数量。7．扫描电子显微镜观察第28天在扫描电子显微镜下观察角膜上皮表面的形态。80目液渗透压测定首先建立BALB／c小鼠泪液渗透压测定值转化表。在实验第0、28天收集小鼠泪液，冰点渗透压仪测

7、定泪液渗透压值，依据建立的BALB／c小鼠泪液渗透压测定值转化表进行泪液渗透压的换算。9．统计学分析方法采用Kruskal—WallisH检验比较角膜荧光素染色评分。采用完全随机设计资料的方差分析和LSD．t比较中央角膜上皮厚度、泪液的分泌量、杯状细胞数量、泪液渗透压值。结果：1．泪液分泌量的测定第0、7天，HO组、HO+IO组、Ho+1％LCA组的酚红棉线浸湿长度的差异无统计学意义(P>O．05)。第14、28天，三组的酚红棉线浸