菟丝子体外和在体实验中对黑素代谢的作用评价

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1、南方医科大学2011级博士学位论文菟丝子体外和在体实验中对黑素代谢的作用评价Assessment0I【一’量给C以Z拓(流"lP刀．SZSseenS7e1tteCt0n▲J●●J1』■●●』●nmelanogeneSlSinvitroanflinlWVD1●●．●课题来源：国家自然科学基金编号81373640学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院王天晶杨柳教授中西医结合临床学术型博士研究生中医药学院答辩委员会主席范瑞强教授答辩委员会委员罗深秋教授许能贵教授吕志平教授贾钰华教授2014年04月16日广州博士学位论文菟丝子体外和在体实验中对黑素代谢的作用评价博士研究生：王天晶指导

2、教师：杨柳教授摘要研究背景色素障碍性皮肤病(如白癜风、黄褐斑)是临床中常见的皮肤疾病，其对形象的损毁给患者带来巨大的心理压力，自古以来一直受到医界的重视，而在亚洲，普通人群对于皮肤美白等美容方面的要求也越来越高，从自然界寻找安全有效的美白剂早已是化妆品界的研究热点。随着分子生物学技术的迅速发展及不同模型的出现，黑素代谢的相关研究取得了极大的进步，中医药在黑素代谢中的作用也积累了丰富的研究成果。然而，由于所选模型不一致，或者药物提取方法不同，部分中医药对黑素代谢的作用时而出现不一致的结果，究其机制却鲜有深入的探讨。本课题在结合古代和现代中医药对黑素代谢作用的基础上，选用菟丝子为实验药物。早

3、在《神农本草经》中菟丝子就被记载有“汁去面皮干”的作用，“庋于’’即黑斑、黧黑斑的意思。菟丝子的功能主治国家标准首次收载于1963年版《中国药典》，记载为：补肝肾，益精，明目。主治腰膝疫痛，遗精，目暗，尿频余沥。未提及菟丝子的外用功效，自1985年修订版开始，历经各次修订，各版均增加了“外治白癜风"的主治标准，2010年版则修订为“外用消风祛斑⋯外治白癜风”，但功效表述为“滋补肝肾，固精缩尿，安胎，明目，止泻”，未能为外治功效提供理论依据。文献检索提示，国外的实验研究认为菟中文摘要丝子能抑制黑色素合成，可用于增色性皮肤病的治疗，未见菟丝子促进黑色素合成的报道；与之相对应的，近现代以来，国

4、内对菟丝子治疗增色性皮肤病的研究较少，其应用于内服方或外治白癜风则更为常见。根据文献，在促进黑色素合成和抑制黑色素合成的研究中菟丝子均被认为发挥调节作用，但菟丝子的作用机理尚无进一步的揭示。菟丝子是否具有双向调节黑素代谢的作用?其调节机制如何?作为色素障碍性皮肤病临床治疗中应用广泛而且有效的一味中药，菟丝子常用于治疗表现完全相反的两类色素障碍性皮肤病，但其发挥作用的机制并不明确，这给临床用药带来了一定的混乱，我们认为对菟丝子的作用机制进一步深入研究具有非常重要的现实意义。色素代谢的研究模型可以分为三类：非细胞模型测试系统，细胞模型测试系统，动物模型测试系统。蘑菇酪氨酸酶是研究受试药物对酶

5、抑制机理最常用的非细胞测试模型，酶法测试的优点是无需细胞培养、简单快速，可对受试物的作用类型进行初步的判断，缺点是体系过于简单，单凭受试物对酪氨酸酶活性的抑制程度判定其作用效果显得片面；细胞测试系统可反应不同受体基因表达的变化，一定程度上弥补了蘑菇酪氨酸酶的缺陷。最常用的细胞是小鼠B16黑色素瘤细胞，其基因组成与人表皮黑素细胞有较高的相似性，较后者相比更容易获取、培养，是用于测试受试物对黑素细胞生物学功能影响的首选模型之一。动物测试系统主要包括C57小鼠、无毛小鼠、豚鼠、Smythline鸡等。斑马鱼作为国际标准化组织认可的5种鱼类模式生物之一，具有与人类相似的黑色素细胞和黑素体，近年来

6、也越来越多的被用于黑素代谢研究领域。又因周身透明，色素细胞在个体发育过程中易被识别、观察，在黑素细胞遗传学、色素代谢相关模型构建、高通量药物筛选中均已得到大量的应用；此外，斑马鱼属低温低氧鱼，其耐寒性和耐热性都很强，饲养容易，产卵量大，与前几种动物模型相比有特有的优势，在黑素细胞相关研究中将有不可替代的地位。虽然斑马鱼在中医药对血管系统、中药毒理学研究中已有所应用，但作为黑素代谢研究的优势模型，斑马鱼在中医药对黑色素合成中的作用研究尚未有报道。II博士学位论文本研究的目的明确菟丝子对黑素代谢中的调节作用及机制；探索斑马鱼模型在中医药黑素代谢实验中的应用。本研究的实验内容及结果菟丝子临床使

7、用的剂型主要为水煎剂或酊剂，根据这一用药传统，本课题分别用水、95％乙醇对其回流提取制成了菟丝子水提物(WSC)、菟丝子醇提物(EFSC)。选用蘑菇酪氨酸酶、B16黑素瘤细胞酪氨酸酶提取液、B16黑素瘤细胞、斑马鱼胚胎作为模型，通过体外实验和在体实验两种方式，系统研究菟丝子对黑素细胞色素代谢的作用机制，并借助高效液相色谱法分析WFSC、EFSC成分的差异。1．在体外实验，本论文首先以蘑菇酪氨酸酶为研究对象，探讨菟丝子提取物WFSC、