铁调素对骨代谢影响的实验研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY博士学位论文论文题目___________铁调素对骨代谢影响的实验研究研究生姓名_____________________沈光思指导教师姓名_________________徐又佳教授专业名称_______________外科学（骨外科）研究方向_______________铁代谢与骨质疏松论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经

2、发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：______________日期:苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂

3、志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被査阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在_____年_月解密后适用本规定。非涉密论文口期巴期：pWH铁调素对骨代谢影响的实验研究中文摘要铁调素对骨代谢影响的实验研究中文摘要“铁蓄积”与“骨代谢”关系研究比较丰富，很多观点认为“铁蓄积”是“绝经后骨质疏松（I型）”的独立危险因素之一。“降铁方法”防治I型骨质疏松，已有较多研究，目前希望能在骨质疏松防治中增加新的临床治

4、疗方法。在降铁方式中，常有“铁螯合剂”和铁调素。铁调素（hepcidin）是Park于2001年发现的一种多肽类激素，是目前发现的唯一的降铁激素。利用铁调素进行的I性骨质疏松防治研究开展很少，本研究以铁调素为干预方法，研究“铁蓄积与骨代谢”的相关性。本研究主要内容第一部分：利用hepcidin基因敲除小鼠模型，了解：hepcidin基因表达缺失的情况下，机体铁代谢及骨代谢变化，这部分主要考虑目前现有的铁蓄积动物模型建模方法干扰因素多，组间差异大，而“hepcidin基因敲除小鼠”是稳定的、组间差异小的、较好的“

5、铁蓄积”模型。第二部分：以铁调素为干预手段，了解小鼠原代成骨细胞培养环境中加入铁调素后的变化，这部分主要考虑成骨细胞膜上有膜铁转运蛋白（Ferroportin，FPN1）及L型钙离子通道，允许铁离子及钙离子进出细胞，当铁调素干预后，成骨细胞内铁离子和钙离子浓度发生变化，这可能是骨代谢发生变化的一个细胞学基础。第三部分：以铁调素为干预手段，了解铁调素干预RAW264.7细胞后，破骨细胞分化、增殖、功能的变化，这部分主要考虑破骨细胞活性增强是绝经后骨质疏松中的一个重要因素，了解铁调素对破骨细胞的影响可为骨质疏松的治

6、疗提供一些实验依据。I中文摘要铁调素对骨代谢影响的实验研究本项目研究路线图铁调素基因敲除血清指标一小鼠铁蓄积小鼠铁代谢指标骨代谢指标CCK8检测ALP染色铁调素对骨二小鼠成骨细胞VanGieson染色代谢的影响VonKossa’s染色不同浓度铁调素CCK8检测TRAP染色三RAW264.7细胞破骨细胞TRAP-5b测定基因检测第一部分铁调素基因缺失对小鼠铁代谢及骨代谢的影响目的观察C57BL/6小鼠在hepcidin基因敲除后，铁代谢与骨代谢变化情况，分析hepcidin基因缺失对小鼠铁代谢及骨代谢的影响。-/

7、-方法将7月龄小鼠根据基因型分为2组：hepcidin基因敲除小鼠（hepc小+/+鼠）与野生型小鼠（hepc小鼠），每组10只，检测小鼠体重、血清铁、铁蛋白、血清Ⅰ型胶原交联C-末端肽（cross-linkedC-lelopeptideoftypeⅠcollagen,CTX）水平、血清骨钙素水平、肝脏和骨组织铁浓度、肝脏与骨组织普鲁士蓝染色、骨骼远端Micro-CT。-/-结果两组小鼠体重及血清CTX水平无明显差异，hepc小鼠的血清铁、铁蛋+/+白、肝脏和骨组织铁浓度指标均显著高于hepc小鼠，差异有统计学

8、意义，普鲁士蓝-/-染色进一步证实肝脏和骨组织存在严重的铁沉积；hepc小鼠的血清骨钙素水平低于+/+-/-hepc小鼠，Micro-CT结果显示：hepc小鼠的骨小梁数量、厚度、密度、骨体积分+/++/+数、皮质骨的厚度、面积均低于hepc小鼠，而皮质骨内径高于hepc小鼠。结论C57BL/6小鼠的hepcidin基因敲除后，可导致机体出现严重的铁蓄积，并导致小鼠骨量下降，这一过程可