帕金森样神经损伤的线粒体机制及积雪草酸神经保护作用的研究

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1、分类号醴21±15UDC鱼15密级坌五编号!Q2窆窆旦鲤兰箜12江孽大擎博士学位论文帕金森样神经损伤的线粒体机制及积雪草酸神经保护作用的研究申请学位级别埴士学科(专业)!逝废检验诊逝堂论文提交日期2Q兰2生兰!旦论文答辩日期2Q兰2生12月学位授予单位和日期江菱太堂2Q羔圣笙3目答辩委员会主席迕丝溪评阅人2012年12月ClassifiedIndex：UDC：Ph．D．DissertationMitochondrialmechanismsunderlyingParkinson-likeneuralinjuryandneur

2、oprotectiveeffectsofasiaticacidBV．，Major：ClinicalLaboratoryDiagnosticsSupervisor：JingGaoJiangsuUniversityDecember，2012独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中

3、以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：挪)o解朗矽日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询

4、。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生院办理。本学位论文属于不保密团。学位论文作者签名：j哆坼厶VI】年l≥月习同指导教师签名：Ⅻ伦年，≥月≥7日摘要目的：帕金森症(Parkinson'sDisease，PD)是一种慢性进行性的神经退变病，50岁以上人群的发病率为1．2％。仪．synuclein蛋白f仪．syn)是Lewy小体的主要组成成份，Lewy小体与PD的发病有着重要的关系。细胞中仅．syn的过表达会导致线粒体中氧自由基的过量产生以及线粒体结构和功能的异常。但在PD发病的过程中，线粒体神经保护机制尚不清楚。积雪草

5、酸(asiaticacid，AAl，是积雪草提取物中的五环三萜烯类组分，具有清除自由基、保护线粒体的作用，可以防治抑郁症，我们以前的研究发现AA具有神经保护作用，但其机制尚不清楚。方法：在鱼藤酮诱导的线粒体轻度损伤模型(模拟PD早期)中，通过Mitotrackerred荧光染料检测线粒体数目，westernblot法检测PGCl．0【和其调控因子SIRTl的表达，氧电极法检测细胞耗氧量三个方面来检测线粒体的变化。DCFHDA荧光染料检测ROS的生成，试剂盒检测还原型谷胱甘肽含量(Glutathione，GSH)和GSH／／

6、氧化型谷胱甘肽(oxidizedglutathione，assa)。在鱼藤酮诱导的细胞急性和慢性损伤模型中，用MTr法检测细胞存活率，用DCFⅧ)A和JC．1荧光染料分别检测ROS生成和线粒体膜电位，westernblot法检测电压依赖性阴离子通道(voltage．dependentanionchannel，VDAC)、PGC．1a的表达，化学交联法检测VDAC的寡聚化。接着用MTr法检测AA对急性鱼藤酮损伤的细胞存活率的影响。在鱼藤酮诱导的急性和慢性细胞模型中，我们检测了ROS生成、线粒体膜电位和线粒体数目以评价线粒体功

7、能，westernblot法检测VDAC、PGC．1a、细胞色素C(CytochromeC，CytoC)和a-syn的表达，化学交联法检测VDAC的寡聚化，以评价AA神经保护作用的线粒体机制。在a．syn过表达的PD果蝇模型中，我们观察了AA对PD果蝇攀爬能力和寿命的影响，用试剂盒检测了AA对PD果蝇体内MDA和GSH的水平的影响，在0【．syn诱导的离体小鼠脑线粒体损伤模型上，检测了线粒体功能、CytoC和0【．syn的表达，以分析AA对抗0c．syn诱导的神经损伤的线粒体机制。最后我们利用荧光标记和计算机分子模拟AA分

8、析了AA的线粒体定位和直接作用靶点。结果：在鱼藤酮诱导的线粒体轻度损伤模型中，与对照组相比，12．5．25nmol／L鱼藤酮可以显著提高细胞耗氧量、GSH含量和GSH／GSSG比值及PGC．1a，但是江苏大学博士学位论文：帕金森样神经损伤的线粒体机制及积雪草酸神经保护作用的研究高于25nmol／L时，鱼