胃癌间质干细胞分泌pdgfd促进胃癌的发展

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1、分类号豳Z三：2UDC616密级公珏．编号1029921114006@江薛大擎硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目置疸闻厦王细胞佥进里旦鱼篁旦促进置疸鲍筮屋作者姓名黄簦答辩Et期2Q1垒笙鱼月!Q目一一一分类号墼35：2UDC鱼!鱼密级公珏绣；号!Q2窆窆圣!!!生QQ鱼硕士学位论文胃癌间质干细胞分泌PDGFD促进胃癌的发展GASTRICCANCER．DERIVEDMSCSECRETEDPDGFDPRoMOTESGASTRICCANCERPRoGRESSION作者姓名：黄锋指导教师：许文荣教授小组

2、成员：张徐讲师王梅讲师申请学位：硕士学科专业：临床检验诊断学论文提交日期：2014年4月28日论文答辩日期：2014年6月10曰学位授予单位：江苏大学学位授予日期：2014年6月答辩委员会主席：陈德玉主任医师基金资助：国家自然科学基金重大研究计划(91129718)：江苏省自然科学基金(BK2012709)；江苏高校优秀科技创新团队(苏教科(2013)10号)：江苏省医学领军人才与创新团队(LJ20I117)：江苏省科技创新与成果转化专项(BL2012055)；独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导

3、下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：专肄日期和I仵6月卜日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子

4、文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密d。学位论文作者签名：燕绛2口、年年6月c口日I⋯币群0。I中年6月／口日江苏大学硕士学位论文摘要目的：间质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是肿瘤微环境的重要组成成分，MSCs可通过旁分

5、泌方式来调节肿瘤的生物学行为。在前期的研究中我们发现骨髓问质干细胞能促进胃癌的发展，我们从胃癌的组织中分离得到了胃癌间质干细胞(GC．MSCs)，然而GC—MSCs是否对胃癌的发展有影响及其机制尚不清楚。本研究旨在探讨胃癌微环境中的GC．MSCs对胃癌细胞迁移和增殖的影响及其相关机制。为进一步探索MSCs对肿瘤的影响提供新的依据。方法：采用Transwell实验检测GC．MSCs与人胃腺癌细胞株(SGC一7901)间接共培养72小时后SGC一7901的迁移的能力，用免疫荧光和Westernblot检测胃癌细胞E一钙黏连蛋

6、白(E．cadhefin)、C【一平滑肌肌动蛋白(0【一smoothmuscleactin，a—SMA)和波形蛋白(vimentin)的表达以及AKT通路的改变。应用平板克隆实验检测胃癌细胞增殖能力的改变。分别以SGC一7901细胞，GC．MSC上清液(GC．MSC—CM)培养SGC一7901细胞后接种裸鼠，构建裸鼠致瘤模型，测定2组模型致瘤瘤体大小和重量。免疫荧光和Westernblot检测间接共培养后胃癌细胞PDGFR—p和p-PDGFR—p的表达，采用Luminx和ELISA检测细胞上清的PDGFB和PDGFD的表

7、达，qRT-PCR检测间接共培养期间GC—MSC细胞PDGFD的变化。人重组的PDGFD标准品刺激胃癌细胞后检测其增殖和迁移的指标。在GC—MSCs与胃癌细胞的共培养体系中加入阻断PDGFR—B的小分予药胃癌间质干细胞分泌PDGFD促进胃癌的发展物后，检测胃癌细胞增殖和迁移能力以及AKT通路的改变。另外，在siRNA干扰掉GC．MSC细胞的PDGFD后，将GC．MSCs与胃癌细胞间接共培养，检测胃癌细胞增殖和迁移能力以及AKT通路的改变。结果：ELISA结果显示GC．MSCs可以旁分泌细胞因子血小板生长因子D(PDGFD

8、)，免疫荧光和Westernblot结果显示GC．MSCs上调SGC．7901细胞PDGFR受体的磷酸化。Transwell实验结果显示GC—MSCs通过旁分泌方式促进胃癌细胞的迁移。Westernblot结果显示GC．MSCs通过旁分泌方式促进胃癌细胞的EMT改变，使E．cadherin表达下调，N-cadheri