传染性法氏囊病病毒vp2基因高变区和bc685株全基因组序列分析及亚单位疫苗的研究

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1、中国兽医药品监察所硕士学位论文传染性法氏囊病病毒VP2基因高变区和BC6/85株全基因组序列分析及亚单位疫苗的研究姓名：于雷申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：李慧姣2012-06摘要传染性法氏囊病(Infectiousbursaldisease，IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectiousbursaldiseasevirus，IBDV)引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性传染病，除直接引起鸡死亡和生产性能下降外，还可导致感染鸡免疫抑制。本实验对IBDV不同毒株VP2基因高变区和BC6／85株基因组进行

2、序列分析，并利用原核表达载体制备亚单位疫苗，获得了以下的结果：(1)以实验室保存的IBDV超强毒株、经典毒株及弱毒株为研究对象，对其VP2高变区进行序列分析，发现不同类型的毒株VP2氨基酸序列有规律的变化。根据VP2高变区核苷酸序列(435bp)构建遗传进化树，结果表明：所有的血清I型均由同一祖先序列演化而来；除BC6／85等4毒株外，其余毒株分为三个大进化群，第一进化群包括弱毒株和变异毒株，第二进化群为经典毒株，第三进化群为vvIBDV。(2)首次克隆了IBDV标准攻毒株(BC6／85株)的全基因组，并进行了序列分析

3、，发现在A、B节段核苷酸与经典毒株、变异株和弱毒株同源性较高，与超强毒株同源性较低；与已发表的三大进化群参考毒株的A、B片段氨基酸序列分析比较，BC6／85株共有21个特有氨基酸，VPl有3个，VP2有11个，VP5有3个，VP3有1个以及VP4有3个：与VP2氨基酸序列比较，VPl、VP3、VP5和VP4氨基酸序列较为保守。(3)将13(26／85株VP2基因克隆到原核表达载体pET-28a，成功构建了VP2基因原核表达载体pET-VP2。表达蛋白以包涵体形式存在于宿主菌中，能够与鸡IBDV抗血清发生特异性反应。将包

4、涵体及变性复性处理后的蛋白以不同剂量免疫接种3周龄SPF鸡，并于首免后14天翅下静脉采血检测血清抗体，21天后攻毒。结果显示：免疫组的血清抗体水平显著高于对照组；攻毒试验结果表明：处理组(分别为160p．g、320lag和640pg)和包涵体组(72099和1440pg)保护率均达100％，包涵体36099组保护率为90％，对照组保护率为0％，与免疫组差异极显著。关键闹：传染性法氏囊病病毒，VP2基因，全基因组，序列分析，亚单位疫苗AbstractInfectiousbursaldisease(IBD)，causedb

5、yinfectiousbursaldiseasevirus(IBDV)，isallacuteandhighlycontagiousinfectiousdiseaseofchickenandturkey．Thediseasemainlydamagesyoungchickensin3-6weeks．Inadditiontocausingchickens’deathandproductiondecrease，thediseasecouldleadtoseriousimmunosuppression．TheVP2hyperva

6、riableregionofdifferentIBDVstrainsandthegenomesequenceofBC6／85wereanalysed．TheIBDVVP2geneofBC6／85wasalsoexpressedinE．Coli．Themainresultsinthisstudyareasfollows：(1)TheVP2genesof10IBDVstrainshavebeensequenced．SequenceanalysisshowedthatVP2hypervariableregionchanged

7、regularlybetweendifferentstrains．PhylogenetictreebasedonthenucleotidesequencesofVP2hypervariableregion(435bp)revealedthatallIBDVstrainsofserumtype1wereevolvedfromthesameancestor，andmostofthestrainscanbedividedintothreemajorevolutionarygroups：thefirstevolutionary

8、groupincludesattenuatedandvariantIBDV，classicalIBDVbelongstothesecondevolutionarygroupandthethirdevolutionarygroupisvvlBDV．(2)Thefull-lengthofdoublesegmentsoftheIBDVB