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时间:2019-03-01
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1、中国兽医药品监察所硕士学位论文传染性法氏囊病病毒VP2基因高变区和BC6/85株全基因组序列分析及亚单位疫苗的研究姓名:于雷申请学位级别:硕士专业:预防兽医学指导教师:李慧姣2012-06摘要传染性法氏囊病(Infectiousbursaldisease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectiousbursaldiseasevirus,IBDV)引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性传染病,除直接引起鸡死亡和生产性能下降外,还可导致感染鸡免疫抑制。本实验对IBDV不同毒株VP2基因高变区和BC6/85株基因组进行
2、序列分析,并利用原核表达载体制备亚单位疫苗,获得了以下的结果:(1)以实验室保存的IBDV超强毒株、经典毒株及弱毒株为研究对象,对其VP2高变区进行序列分析,发现不同类型的毒株VP2氨基酸序列有规律的变化。根据VP2高变区核苷酸序列(435bp)构建遗传进化树,结果表明:所有的血清I型均由同一祖先序列演化而来;除BC6/85等4毒株外,其余毒株分为三个大进化群,第一进化群包括弱毒株和变异毒株,第二进化群为经典毒株,第三进化群为vvIBDV。(2)首次克隆了IBDV标准攻毒株(BC6/85株)的全基因组,并进行了序列分析
3、,发现在A、B节段核苷酸与经典毒株、变异株和弱毒株同源性较高,与超强毒株同源性较低;与已发表的三大进化群参考毒株的A、B片段氨基酸序列分析比较,BC6/85株共有21个特有氨基酸,VPl有3个,VP2有11个,VP5有3个,VP3有1个以及VP4有3个:与VP2氨基酸序列比较,VPl、VP3、VP5和VP4氨基酸序列较为保守。(3)将13(26/85株VP2基因克隆到原核表达载体pET-28a,成功构建了VP2基因原核表达载体pET-VP2。表达蛋白以包涵体形式存在于宿主菌中,能够与鸡IBDV抗血清发生特异性反应。将包
4、涵体及变性复性处理后的蛋白以不同剂量免疫接种3周龄SPF鸡,并于首免后14天翅下静脉采血检测血清抗体,21天后攻毒。结果显示:免疫组的血清抗体水平显著高于对照组;攻毒试验结果表明:处理组(分别为160p.g、320lag和640pg)和包涵体组(72099和1440pg)保护率均达100%,包涵体36099组保护率为90%,对照组保护率为0%,与免疫组差异极显著。关键闹:传染性法氏囊病病毒,VP2基因,全基因组,序列分析,亚单位疫苗AbstractInfectiousbursaldisease(IBD),causedb
5、yinfectiousbursaldiseasevirus(IBDV),isallacuteandhighlycontagiousinfectiousdiseaseofchickenandturkey.Thediseasemainlydamagesyoungchickensin3-6weeks.Inadditiontocausingchickens’deathandproductiondecrease,thediseasecouldleadtoseriousimmunosuppression.TheVP2hyperva
6、riableregionofdifferentIBDVstrainsandthegenomesequenceofBC6/85wereanalysed.TheIBDVVP2geneofBC6/85wasalsoexpressedinE.Coli.Themainresultsinthisstudyareasfollows:(1)TheVP2genesof10IBDVstrainshavebeensequenced.SequenceanalysisshowedthatVP2hypervariableregionchanged
7、regularlybetweendifferentstrains.PhylogenetictreebasedonthenucleotidesequencesofVP2hypervariableregion(435bp)revealedthatallIBDVstrainsofserumtype1wereevolvedfromthesameancestor,andmostofthestrainscanbedividedintothreemajorevolutionarygroups:thefirstevolutionary
8、groupincludesattenuatedandvariantIBDV,classicalIBDVbelongstothesecondevolutionarygroupandthethirdevolutionarygroupisvvlBDV.(2)Thefull-lengthofdoublesegmentsoftheIBDVB
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