鸡传染性法氏囊病病毒地方流行株VP1基因片段的扩增及序列分析.pdf

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1、动物医学进展。2015，36(4)：19—23ProgressinVeterinaryMedicine鸡传染性法氏囊病病毒地方流行株VP1基因片段的扩增及序列分析何秀苗。，陈佳，康斯那，陈盛峰，韦美萍，韦平(1．广西民族大学海洋与生物技术学院，广西南宁530006；2．广西大学，广西南宁530004；3．广西林产化学与工程重点实验室，广西南宁530006；4．南宁市动物卫生监督所，广西南宁530001)摘要：为了解鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)地方流行毒株在基因组B节段关键序列上的分子进化情况，通过反转录PCR(RT—PC

2、R)技术对6个IBDV不同地方分离株的VP1基因中与病毒致病型相关的一个片段(1518bp～1997bp，共480bp)进行扩增，并对所获得的VP1480bp片段进行核苷酸的序列测定，与IBDV参考株和常用疫苗株的相应序列进行比较分析和绘制遗传进化树。结果表明，6个分离株与参考株在VP1RNA聚合酶基序Ⅵ和基序Ⅶ上均保守，在特征性氨基酸位点上，3个广西分离株QX0604、WZ0704和NN0603与参考的vvlBDV相同，而分离株BH111(广西)、JS17(江苏)和HUN0804(湖南)则既具有vvIBDV的位点特征，又具

3、有经典毒株特征，但不同毒株在不同位点上表现不同；在同源性分析上，JS17、BH111、QXo6o4、WZo7o4和NN0603等5个毒株与参考用vvIBDV毒株的同源性较高，在核苷酸和氨基酸水平上分别为92．5～100．0和97．5～100．0，但与2个常用疫苗株和经典毒株的同源性仅分别为87．9～9O．0和96．2～96．9，分离株HUN0804则与经典毒株和2个疫苗株更接近；在遗传进化树上，JS17和BH111等5个分离株与vvIBDV在一个分支上，亲缘关系更近，而HUN0804则与经典毒株和2个疫苗株在另一个大分支。表

4、明不同分离株在VP1的功能基序上保持保守，但分离株在特征性氨基酸位点上则发生了变化，大多数分离株与常用疫苗株之间的同源性较低，亲缘关系较远。关键词：传染性法氏囊病病毒；VP1基因；反转录PCR；分子特征中图分类号：$852．659．4；$858．31文献标识码：A文章编号：1007—5038(2015)04—0019—05传染性法氏囊病(Infectiousbursaldisease，毒抗原性和致病性相关的VP2蛋白高变区IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectiousbursal(vVP2)_3]，但近些年来的研究发现

5、，VP1蛋白与病diseasevirus，IBDV)引起雏鸡的急性、高度接触性毒的包装和毒力的改变等有关口]，对一些毒株的传染和杀淋巴细胞性的传染病口]。该病的危害主要VP1进行序列分析发现，不同毒力株的VP1基因序是由IBDV感染而引起的3周龄～6周龄鸡的发病列有差异]，因此，对流行毒株B片段的研究及其基死亡或免疫抑制，后者可导致病鸡免疫力下降，对其因序列的比较分析，结合A节段的分析结果，将会他疾病的易感性增加等，给养禽业造成巨大的经济提供IBDV流行株分子进化的全面资料。Tiwarir损失。IBDV基因组由A(3．2kb

6、p)、B(2．8kbp)两AK等[]研究表明，位于B节段1518bp～1997bp个RNA节段组成。A节段有2个开放阅读框的一个共480bp序列在IBDV野毒株与经典强毒株(ORF)，编码形成VP2、VP4、VP3和VP5蛋白。B和疫苗株中有差别，依据该片段内部的酶切位点特片段有1个ORF，编码产生具有RNA聚合酶活性的征，可以用于区分野毒株与经典强毒株和疫苗株，并VP1蛋白[-23。IBDV分为不同的致病型，即超强毒成功应用于印度野毒株和疫苗株的区分。此外，该株(vvIBDV)、经典强毒株(cvIBDV)、变异株(atIB

7、—序列包含了VP1蛋白的2个重要功能基序，即基序DV)和致弱毒株。不同毒株在基因组上表现不同，Ⅵ和基序Ⅶ，而VP1中的这些基序则对VP1蛋白过去对IBDV的分子流行病学研究主要集中在与病发挥RNA聚合酶功能具有重要的作用。本研究将收稿日期：2014-07—24基金项目：广西自然科学基金项目(2014GXNSFDA118018)；广西高校科学技术研究项目(2013YB069，200809LX255)；南宁市科技攻关项目(20142079)作者简介：何秀苗(1975一)，女，广西东兰人，博士，教授，主要从事微生物与免疫学研究。*

8、通讯作者20动物医学进展2015年第36卷第4期(总第262期)对IBDVB节段中与致病性相关的该480bp的关键V)比例加入PBS，研磨制成匀浆，反复冻融3次，序列进行序列分析，以获得不同地方流行株在该片4000r／rain离心5min，取上清，按TRIzo1操作说段上的进化趋势，为IB