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时间:2019-02-28
《全基因组筛选及细胞融合探讨肿瘤增殖关键基因及转移相关机制》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、北京协和医学院博士研究生学位论文博士学位论文学校代码:10023学号:B2009259全基因组筛选及细胞融合探讨肿瘤增殖关键基因及转移相关机制所院:北京协和医学院基础学院姓名:米蕊芳指导教师:李利民教授导师小组:病理学系小组学科专业:病理学与病理生理学研究方向:肿瘤增殖与转移机制完成日期:2012年5月北京协和医学院博士研究生学位论文目录目录⋯⋯.⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯........⋯⋯...2中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯.4英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.61菏言...⋯...⋯⋯...⋯⋯...⋯..⋯⋯..⋯.......⋯91
2、.全基因组随机基因敲除平台筛选抑制胰腺癌增殖关键基因⋯.92.细胞融合增强黑色素瘤细胞转移能力⋯⋯.⋯⋯.⋯....12实验材料..⋯..⋯.⋯⋯.⋯...⋯.⋯⋯⋯.⋯⋯....17实验方法................................................27实验结果⋯⋯.⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯.....471.全基因组随机基因敲除平台筛选抑制胰腺癌增殖关键基因⋯471.1胰腺癌细胞系AsPC.1细胞株性状确定⋯⋯⋯⋯⋯⋯471.2基因搜寻载体PB.TNO质粒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯481.3胰腺癌AsPC.1细胞tet-off
3、细胞系的建立.⋯⋯⋯⋯⋯501.4胰腺癌细胞全基因组突变文库的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯.521.5胰腺癌增殖追踪探针CFSE追踪细胞增殖⋯⋯⋯⋯⋯551.6“克隆法"筛选胰腺癌增殖减慢关键基因⋯⋯⋯⋯⋯611.7实验工作总结I⋯.⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯662.细胞融合增强黑色素瘤细胞转移能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯672.1荧光标记B16.F10黑色素瘤细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..672.2细胞融合方法条件摸索及PHA.PEG融合方法建立⋯⋯.69北京协和医学院博士研究生学位论文2.3黑色素瘤融合细胞标志性性状特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯722.4黑色素瘤融合细胞增殖速度降低⋯⋯⋯⋯...⋯
4、⋯..742.5黑色素瘤融合细胞黑色素分泌能力增强⋯.⋯.⋯.⋯..762.6黑色素瘤融合细胞转移能力增强⋯⋯⋯.⋯...⋯⋯.782.7黑色素瘤融合细胞基因组呈现稳定性⋯⋯⋯.⋯⋯⋯802.8芯片分析黑色素融合细胞相应分子变化⋯⋯⋯⋯⋯..812.9实验工作总结Ⅱ⋯⋯⋯⋯⋯..⋯....⋯.⋯⋯⋯85讨论...⋯.⋯⋯......⋯⋯...⋯........⋯⋯...⋯.861.全基因组随机基因敲除平台筛选抑制胰腺癌增殖关键基因..862.细胞融合增强黑色素瘤细胞转移能力⋯⋯.⋯..⋯⋯..89参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯.⋯.⋯⋯⋯93缩略语表⋯⋯⋯⋯⋯
5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..100文献综述......。....。......。..⋯⋯。...⋯⋯.⋯⋯⋯102致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯.⋯⋯⋯112附录1:发表文章及摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯..113附录2:个人简历⋯.⋯⋯⋯...⋯...⋯.....⋯...⋯114附录3:独创性声明及学位论文版权使用授权书⋯⋯⋯.⋯115北京协和医学院博士研究生学位论文摘要目的:肿瘤细胞过度增殖及转移是肿瘤发生和发展过程中的重要特征,也是肿瘤研究的重点和肿瘤治疗的关键靶点。本课题分别以胰腺癌和黑色素瘤细胞为模型,研究抑制肿瘤细胞过度增殖和转移的关键基因及其机制。胰
6、腺癌的发病率死亡率处于癌症的前十位。胰腺癌确诊后往往病情进展迅速,细胞增殖速度快,死亡率高,是临床预后最差的消化系统恶性肿瘤之一。本部分课题旨于通过全基因组随机基因敲除调控技术平台和CFSE(carboxyflUoresceinsuccinimidylester)增殖追踪方法,筛选抑制肿瘤细胞增殖的关键基因,为临床肿瘤治疗提供新的靶点。黑色素瘤是皮肤肿瘤的主要致死因素,其致死原因主要是黑色瘤的高转移率,病人在确断时往往已有淋巴结或远端器官的转移。细胞融合是肿瘤发生和发展过程中常见的现象之一,在多种肿瘤及其转移瘤中(如乳腺癌,前列腺癌以及黑色素瘤)都可见肿瘤细胞融
7、合及其引起的多倍体现象,并与疾病的预后呈负相关。本部分课题旨于研究黑色素瘤细胞融合后,肿瘤细胞转移的病理特征及转移相关机制。方法:I通过构建基因搜寻载体TNO.PB和建立稳定表达tTA并受四环素调控的细胞系。转入搜寻载体TNO.PB质粒和转座酶mPB质粒,筛选获得全基因组范围内的胰腺癌随机基因突变文库。应用CFSE荧光探针追踪胰腺癌细胞增殖和流式分选方法分选增殖减慢细胞亚群。所筛选到的细胞克隆通过CFSE追踪或四甲基偶氯唑盐(MTT)增殖实验验证四环素介导的基因表达调控。Ⅱ通过建立改良植物血凝素-聚乙二醇(phytohemagglutinin-polyethyl
8、eneglycol,PH
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